5-HD對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓的影響及生長因子的作用.pdf

1、目的:
　　 研究線粒體ATP敏感性鉀通道(mitochondrial ATP-sensitive potassiumchannel,mitoKATP)的抑制劑5-羥基奎酸鹽(5-hydroxydecanoate,5-HD)對(duì)大鼠肺動(dòng)脈高壓的影響,探討血管內(nèi)皮生長因子、血小板衍生生長因子、表皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子β1在肺動(dòng)脈高壓形成過程中的作用及其與線粒體ATP敏感性鉀通道的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.低氧

2、肺動(dòng)脈高壓模型的建立及分組。健康成年的雄性SD大鼠24只,隨機(jī)分為三組:A組:正常組；B組:低氧組:將大鼠置于開放式常壓低氧艙內(nèi),測氧儀連續(xù)監(jiān)測,保持艙內(nèi)氧濃度為10.0±0.5％,二氧化碳濃度低于3.0％,每天低氧8小時(shí),連續(xù)4周,并皮下注射PBS0.1ml/d。C組:干預(yù)組:即低氧+mitoKATP抑制劑(5-HD)組,大鼠在低氧一周后,皮下注射5-HD5mg/kg·d,連續(xù)三周。麻醉后,采用右心導(dǎo)管術(shù)法記錄肺動(dòng)脈壓力曲線,測定肺動(dòng)

3、脈平均壓。取心臟,分離并稱取右心室與左心室+室間隔和的重量,計(jì)算RV/(LV+S)的比率作為右室肥厚的指數(shù)(RVHI)。
　　 2.用ELISA和免疫組化法檢測PDGF,VEGF,EGF,TGF-β1在肺組織勻漿和肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞中的表達(dá)。右下肺組織勻漿后按照雙抗體夾心ELISA試劑盒的說明書進(jìn)行操作,檢測各組PDGF,VEGF,EGF,TGF-β1的表達(dá)水平。左下肺置新鮮配置的4％多聚甲醛中固定48小時(shí),常規(guī)脫

4、水,石蠟包埋,切成4um厚的切片,按照PV-9001的的說明書進(jìn)行,并用二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色。其中PDGF,VEGF,EGF,TGF-β1各一抗的稀釋濃度均為1:100,用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。結(jié)果判斷:PDGF,VEGF,EGF,TGF-β1等蛋白主要位于細(xì)胞漿中,細(xì)胞漿呈棕黃色顆粒為陽性表達(dá),觀察各組肺動(dòng)脈PDGF,VEGF,EGF,TGF-β1的表達(dá)水平及表達(dá)位點(diǎn)的變化。
　　 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有數(shù)據(jù)以均

5、數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,以SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素的方差分析,兩兩間用LSD-t檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.01表示差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.低氧組的肺動(dòng)脈平均壓(16.1±1.20mmHg)較正常組(9.87±0.87mmHg)、干預(yù)組(11.85±1.03mmHg)均明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01,P<0.05)。低氧組的RVHI(0.2913±0.0137

6、5)較正常組(0.2602±0.03018)明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),與干預(yù)組(0.2912±0.0233)間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 2.ELISA結(jié)果表明EGF在低氧性肺動(dòng)脈高壓、干預(yù)組中較正常組均有明顯升高,分別為(160.83±52.63pg/mg,154.17±38.79pg/mg,97.52±38.56pg/mg),有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。但低氧組與干預(yù)組間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.0

7、5)。而PDGF,VEGF,TGF-β1在低氧肺動(dòng)脈高壓大鼠肺組織中較正常組雖有升高趨勢,但無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 3.免疫組化結(jié)果表明肺動(dòng)脈上TGF-β1,EGF,PDGF在低氧時(shí)表達(dá)量[(6.46±0.86)％,(9.52±2.12)％,(8.61±1.64)％]較正常組[(4.29±0.83)％,(6.65±1.3)％,(6.99±1.13)％]均有明顯升高,與正常組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01,P<0.

8、05),且在肺動(dòng)脈平滑肌層表達(dá)明顯。其中TGF-β1在干預(yù)組[(4.79±1.5)％]表達(dá)明顯下降,與低氧組間有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01),與正常組間無明顯差異(P>0.05)。干預(yù)組EGF[(8.09±1.87)％]與正常組及低氧組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。VEGF在干預(yù)組[(7.74±2.57)％]與正常組[(6.81±1.68)％]及低氧組[(7.34±1.57)％]間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論: