可注射型去端肽膠原包埋MSCs對免椎間盤退變的早期修復(fù)作用.pdf

1、第一部分：可注射型去端肽膠原包埋兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)
　　 目的：對兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)進(jìn)行體外培養(yǎng)、擴(kuò)增及鑒別，并探討MSCs與去端肽膠原共同培養(yǎng)后MSCs的生長、存活情況，為進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：行脛骨穿刺抽取骨髓2mL，倒置顯微鏡下觀察其原代及傳代后細(xì)胞形態(tài)，使用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞表面標(biāo)記物CD34、CD44、CD90。證明是骨髓基質(zhì)干細(xì)胞后將其與可注射型去端肽膠原復(fù)合培養(yǎng)，使用倒置顯

2、微鏡、雙醋酸．碘化丙啶(FDA-PI)雙熒光染色觀察MSCs在凝膠內(nèi)的存活生長情況。
　　 結(jié)果：體外成功培養(yǎng)并擴(kuò)增兔MSCs細(xì)胞，細(xì)胞高表達(dá)CD44、CD90、不表達(dá)CD34。倒置顯微鏡觀察見MSCs在凝膠內(nèi)生長良好，培養(yǎng)7天即出現(xiàn)少量典型長梭形形態(tài)；FDA-PI雙染色示MSCs在凝膠內(nèi)存活良好，培養(yǎng)14天存活率>99％，未見明顯死亡細(xì)胞。
　　 結(jié)論：經(jīng)密度梯度法分離培養(yǎng)的細(xì)胞是MSCs，同時MSCs在去端肽膠原凝膠

3、內(nèi)生長、存活良好，不影響其生物活性；去端肽膠原與MSCs具有良好的生物相容性。
　　 第二部分：可注射型去端肽膠原包埋骨髓基質(zhì)干細(xì)胞對兔椎間盤退變的早期修復(fù)作用
　　 目的：探討兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)復(fù)合可注射型去端肽膠原移植治療兔椎間盤退變的可行性，為后續(xù)的臨床研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：新西蘭白兔20只，隨機(jī)分為3組：1）正常組(n=4)，不做任何處理；2）假手術(shù)組(n=8)，只針刺抽吸髓核法誘導(dǎo)椎

4、間盤退變模型；3）移植組(n=8)，進(jìn)行退變模型建立并行MSCs-去端肽膠原復(fù)合物移植治療。將MSCs-去端肽膠原復(fù)合物注射移植入退變椎間盤后4周、6周，每個時間點(diǎn)正常組2只，假手術(shù)組4只，移植組4只，行腰椎側(cè)位X光片檢測椎間盤高度，并計算椎間盤高度指數(shù)(DHI)；腰椎MRI測量椎間盤T2加權(quán)像信號強(qiáng)度變化；大體觀察、HE染色觀察椎間盤退變程度并分級；RT-PCR檢測椎間盤II型膠原及聚集蛋白聚糖的基因表達(dá)。
　　 結(jié)果：DHI

5、在正常組未見明顯下降，移植組可見輕度狹窄，而假手術(shù)組明顯狹窄，移植組DHI%與其余各組間相比具有明顯差異(P＜0.05)。MRI結(jié)果顯示移植組與假手術(shù)組椎間盤信號強(qiáng)度均有不同程度的下降，但移植組信號強(qiáng)度明顯強(qiáng)于假手術(shù)組，且具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。大體觀察及組織學(xué)檢查結(jié)果顯示，假手術(shù)組椎間盤結(jié)構(gòu)明顯退變，纖維環(huán)疤痕增生嚴(yán)重，髓核組織缺失。移植組纖維環(huán)結(jié)構(gòu)稍紊亂，可見再生髓核組織。組織學(xué)評分提示移植組評分明顯優(yōu)于假手術(shù)組(P＜0.0