馬鈴薯病毒病RT-PCR檢測(cè)體系的建立及病毒病在四川省的種類與分布.pdf

1、馬鈴薯是一種極易感染病毒的茄科作物，目前已報(bào)道的感染馬鈴薯的病毒多達(dá)35種以上，其中危害嚴(yán)重的有6～7種。病毒的侵染除直接引起馬鈴薯病毒病外，更重要的是導(dǎo)致種質(zhì)退化，引起產(chǎn)量的急劇下降，成為制約馬鈴薯生產(chǎn)的主要因素之一。我國(guó)主要危害馬鈴薯的病毒有5種，它們分別是馬鈴薯X病毒(Potato Virus X，PVX)、馬鈴薯Y病毒(Potato virus Y，PVY)、馬鈴薯S病毒(Potato virus S，PVS)、馬鈴薯A病毒(P

2、otato virus A，PVA)、馬鈴薯卷葉病毒(Potato Leaf Roll Virus，PLRV)。 目前，酶聯(lián)免疫方法是普遍采用的馬鈴薯病毒檢測(cè)方法，它可直接提取罹病毒葉片粗汁液檢測(cè)，在短時(shí)間內(nèi)檢測(cè)大量樣品，因此適宜大量的樣品檢測(cè)，但存在制備血清費(fèi)時(shí)、成本高、靈敏度不足的缺點(diǎn)。病毒基因反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增檢測(cè)方法(RT-PCR)是一種近年新興的建立在病毒基因水平的檢測(cè)方法，具有檢測(cè)快速，靈敏度高，特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，在馬鈴薯病毒

3、的檢測(cè)上具有更大的應(yīng)用前景。目前國(guó)內(nèi)大多省份還沒(méi)有建立馬鈴薯病毒RT-PCR方法，因此，針對(duì)我國(guó)主要發(fā)生的馬鈴薯五種病毒建立RT-PCR檢測(cè)體系具有重要現(xiàn)實(shí)意義，本文根據(jù)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道的上述五種馬鈴薯病毒病的擴(kuò)增引物，分別從感染病毒的馬鈴薯葉片中提取植物的總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到了與預(yù)期片段長(zhǎng)度一致的PCR特異擴(kuò)增產(chǎn)物，分別建立了上述五種馬鈴薯病毒的RT-PCR檢測(cè)體系，并將建立的體系實(shí)際應(yīng)用于四川省的馬鈴薯病

4、毒病的鑒定，在分子水平上為四川省的馬鈴薯檢測(cè)提供了新的手段。 四川省近20年來(lái)未對(duì)馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)病毒病的種類和分布進(jìn)行調(diào)查，為了解馬鈴薯病毒病在四川的種類和分布，為抗病品種選育、建立脫毒種薯的質(zhì)量控制體系及最終控制馬鈴薯的退化速度，本研究在四川省馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)內(nèi)平原、丘陵、高山等不同生態(tài)區(qū)21個(gè)縣區(qū)采集了罹病植株、脫毒試管苗以及薯塊等981份樣品，利用酶聯(lián)免疫方法(ELISA)，采用8種馬鈴薯病毒抗血清，對(duì)所有樣品開(kāi)展了病毒種類和帶