慢性腎衰竭大鼠主動脈鈣化與血管收縮張力關(guān)系的研究.pdf

1、目的:
　　慢性腎衰竭(Chronic Renal Failure，CRF)患者易發(fā)生血管鈣化，且以中膜鈣化為特征性改變，其主要病理表現(xiàn)為羥基磷灰石在凋亡的血管平滑肌細胞沉積，而平滑肌細胞的主要功能是維持血管收縮張力平衡。平滑肌細胞原有結(jié)構(gòu)的改變使收縮張力的維持失衡，導致血流動力學的改變以及心腦血管事件發(fā)生率和死亡率增加。但是目前對于慢性腎衰竭血管收縮張力的變化研究較少。因此，本研究通過檢測慢性腎衰竭大鼠胸主動脈血管鈣化與相應(yīng)部位

2、收縮張力的變化，探討二者之間的關(guān)系，為臨床監(jiān)測慢性腎衰竭患者血管功能的改變找到更可靠的理論依據(jù)。
　　方法:
　　1慢性腎衰竭大鼠血管鈣化模型制備
　　清潔級雄性SD大鼠30只，7周齡，重約200g，購自河北醫(yī)科大學實驗動物中心，于屏障環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機分為正常對照組、慢性腎衰竭組及慢性腎衰竭血管鈣化組，正常對照組給予甲基纖維素灌胃，慢性腎衰竭及慢性腎衰竭血管鈣化組給予甲基纖維素+腺嘌呤灌胃，2周后采用隔日灌胃

3、的方法，正常對照組及慢性腎衰竭組采用甲基纖維素，慢性腎衰竭血管鈣化組采用甲基纖維素+骨化三醇灌胃方法制備動物模型。
　　2慢性腎衰竭大鼠血管鈣化主動脈張力測定
　　仔細分離大鼠胸主動脈，剝離周圍多余脂肪組織，取下3～4根血管環(huán)，懸掛于張力測定系統(tǒng)，采用離體血管環(huán)灌流方法，調(diào)節(jié)好前負荷后，檢測內(nèi)皮完整性，最終建立苯腎(10-11-10-5mol/L)收縮反應(yīng)曲線并測定胸主動脈血管張力。
　　3慢性腎衰竭大鼠血清學指標及主

4、動脈鈣含量檢測
　　全自動生化分析儀檢測血清學指標;運用鄰甲酚酞絡(luò)合酮比色法測定腹主動脈鈣含量。
　　4慢性腎衰竭大鼠血管鈣化主動脈組織病理
　　組織包埋切片，運用EVG染色、Von Kossa染色方法觀察血管組織彈力纖維和鈣鹽沉積的情況。
　　5慢性腎衰竭大鼠主動脈超微結(jié)構(gòu)觀察
　　取胸主動脈近心端，固定于電鏡液中，采用組織透射電鏡方法觀察胸主動脈超微結(jié)構(gòu)改變。
　　6統(tǒng)計學處理
　　激動劑誘

5、發(fā)的血管收縮反應(yīng)以實測值(g)的mean±sx表示。兩條濃度-反應(yīng)量效曲線之間的比較，采用雙因素方差分析(two-way ANOVA)，當P＜0.05時，進一步采用Bonferroni's test比較。統(tǒng)計分析使用GraphPad instat軟件，圖形處理使用GraphPad Prism5.0軟件。其余結(jié)果用(x)±s表示，SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1慢性腎衰竭

6、大鼠血管鈣化模型構(gòu)建
　　腎臟病理:光鏡下，正常對照組大鼠腎小球及腎小管及腎間質(zhì)未見明顯改變;慢性腎衰竭組及慢性腎衰竭血管鈣化組大鼠可見腎小管擴張，管腔內(nèi)及腎間質(zhì)可見散在黃褐色結(jié)晶物質(zhì)沉積。血清學指標:與正常對照組相比，慢性腎衰竭組及慢性腎衰竭血管鈣化組血肌酐均升高，分別為62.50±12.18 vs33.50±4.96，66.13±12.78 vs33.50±4.96，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義;與正常對照組相比，慢性腎衰竭

7、組及慢性腎衰竭血管鈣化組血尿素氮均升高，分別為16.95±6.08 vs6.71±1.58，22.81±13.33 vs6.71±1.58，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義;與正常對照組相比，慢性腎衰竭及慢性腎衰竭血管鈣化組血磷均升高，分別為2.83±0.28 vs1.94±0.24，2.68±0.33 vs1.94±0.24，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義。與慢性腎衰竭組相比，慢性腎衰竭血管鈣化組血肌酐、尿素氮、血磷均升高，分別為62.

8、50±12.18vs66.13±12.78,16.95±6.08 vs22.81±13.33,2.83±0.28 vs2.68±0.33,P＞0.05，差異無統(tǒng)計學意義。
　　2慢性腎衰竭血管鈣化大鼠主動脈張力變化
　　慢性腎衰竭血管鈣化組血管收縮張力，與正常對照組相比，最大值(Emax)下降，1.72±0.05 vs2.42±0.05，P=0.001，差異有統(tǒng)計學意義;半數(shù)有效濃度(EC50)0.20±0.09 vs0.0

9、9±0.05，P＞0.05，差異無統(tǒng)計學意義;與慢性腎衰竭組相比，最大值(Emax)與半數(shù)有效濃度(EC50)分別為1.72±0.05 vs1.68±0.15，0.20±0.09 vs0.33±0.38，P＞0.05，差異均無統(tǒng)計學意義。
　　3慢性腎衰竭血管鈣化大鼠主動脈結(jié)構(gòu)改變
　　光鏡結(jié)果顯示，慢性腎衰竭血管鈣化組可見彈性纖維嚴重斷裂和鈣鹽沉積，慢性腎衰竭組可見彈力纖維排列紊亂，變細，未見鈣鹽沉積。電鏡結(jié)果顯示，慢性腎