脂肪因子Sfrp5與肥胖及其相關(guān)代謝紊亂的相關(guān)性研究.pdf

1、背景和目的：
　　 隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展和人們生活水平的提高，肥胖已成為現(xiàn)代社會(huì)中最常見的營(yíng)養(yǎng)障礙性疾病。肥胖是代謝性疾病如2型糖尿病的易感因素，經(jīng)常與脂肪組織的低炎癥狀態(tài)相關(guān)。脂肪組織作為內(nèi)分泌器官在這種“炎癥”狀態(tài)中發(fā)揮的作用也引起了高度關(guān)注(4)。脂肪組織中促炎細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子的分泌失調(diào)是造成人體肥胖的重要原因。
　　 分泌型卷曲相關(guān)蛋白-5(Sfrp5)是一種新鑒定的抗炎脂肪因子，是分泌卷曲相關(guān)蛋白(secrete

2、d Frizzled-related protein，SFRP)家族中的一員，它可以抑制慢性炎癥狀態(tài)，最終增加胰島素敏感性，在肥胖以及糖尿病小鼠模型中表達(dá)下調(diào)。研究表明這些蛋白的一個(gè)共同特征為擁有一個(gè)富含半胱氨酸的區(qū)域(cysteine-rich domain，CRD)，該區(qū)域與Wnt受體Frizzled蛋白的CRD具有高度同源性。因此，SFRP蛋白家族可與Frizzled蛋白受體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合Wnt配體，從而對(duì)Wnt通路發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用。Sf

3、rp5的抗炎作用是通過與脂肪組織表達(dá)的Wnt5a結(jié)合，抑制Wnt非經(jīng)典通路的下游靶點(diǎn)JNK的活化，進(jìn)而減少炎癥因子的分泌，并拮抗胰島素受體底物-1(IRS-1)絲氨酸307磷酸化而實(shí)現(xiàn)(3，6)。脂肪細(xì)胞分化與糖及脂肪代謝、胰島素抵抗、2型糖尿病、高脂血癥等有非常密切的關(guān)系(7)。
　　 本研究的目的是以3T3-L1前脂肪細(xì)胞為研究對(duì)象，觀察3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中Sfrp5表達(dá)和分泌的變化趨勢(shì)。并建立胰島素抵抗細(xì)胞

4、模型，檢測(cè)建模及羅格列酮、二甲雙胍藥物干預(yù)后Sfrp5 mRNA表達(dá)和蛋白分泌的變化。并探討非糖尿病個(gè)體血清中脂肪因子SFRP5水平與肥胖、胰島素抵抗的相關(guān)性。
　　 方法：
　　 體外培養(yǎng)3T3-L1脂肪前體細(xì)胞，應(yīng)用1-甲基-3-異丁基黃嘌呤(IBMX)、地塞米松、胰島素誘導(dǎo)其分化，予以1μM地塞米松、100nM胰島素及10ng/l TNF-α、10μM羅格列酮及1mM_甲雙胍干預(yù)分化第6天的3T3-L1細(xì)胞過夜(2

5、4小時(shí))。采用RT-PCR、ELISA技術(shù)檢測(cè)不同分化時(shí)間、調(diào)節(jié)因素下脂肪細(xì)胞Sfrp5 mRNA表達(dá)以及上清中蛋白分泌水平。
　　 將244例受試者按體重指數(shù)(BMI)分為對(duì)照組(77例，BMI<24kg/m2)和超重及肥胖組(170例，BMI≥24kg/m2)。ELISA法測(cè)定血清SFRP5水平。數(shù)據(jù)分析采用SPSS17.0版本，描述性結(jié)果采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差，兩組間比較采用T檢驗(yàn)；兩變量相關(guān)分析運(yùn)用Pearson相關(guān)；多元逐步

6、線性回歸用于調(diào)整協(xié)變量的影響和檢驗(yàn)獨(dú)立因素。在所有分析結(jié)果中P＜0.05被認(rèn)為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 (1)Sfrp5在3T3-L1前脂肪細(xì)胞無表達(dá)，隨著前脂肪細(xì)胞分化成熟，該基因轉(zhuǎn)錄、蛋白分泌水平逐漸上調(diào)，mRNA轉(zhuǎn)錄水平在第9天達(dá)到高峰(45±6倍，P＜0.001))，上清中蛋白的分泌延遲于mRNA表達(dá)，在分化第5-6天可以檢測(cè)到。
　　 (2)1μ M地塞米松、100nM胰島素及10ng/l

7、 TNF-a分別使成熟脂肪細(xì)胞的Sfrp5mRNA表達(dá)水平減少25％(P＜0.01)、43％(P＜0.01)、58％(P＜0.01)，上清中蛋白分泌水平減少10％(P＜0.05)、28％(P＜0.01)、40%(P＜0.01)、57％(P＜0.01)；
　　 (3)10μM羅格列酮、1mM=甲雙胍分別使成熟脂肪細(xì)胞的Sfrp5 mRNA表達(dá)量增加25％(P＜0.01)、28％(P＜0.01)，上清中蛋白分泌量增加20%(P＜0.

8、01)、28％(P＜0.01)。
　　 (4)在總體受試者中，肥胖組血清中Sfrp5的水平顯著低于對(duì)照組(4.46±0.72 vs4.69±0.64ng/ml，P＜0.05)。
　　 (5)血清Sfrp5水平與年齡、BMI、收縮壓、舒張壓、平均壓、尿酸無明顯相關(guān)性(P＞0.05)，血清Sfrp5水平與女/男性別比、腰臀比、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇、空腹血糖、FINS、HOMA2-%B、HOMA2-IR之間存

9、在顯著負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.168，-0.134，-0.132，-0.154，-0.146，-0.161，-0.312，-0.228，-0.281，P＜0.05)。血清Sfrp5與高密度脂蛋白膽固醇之間存在顯著正相關(guān)(r值為0.171，P＜0.05)。
　　 (6)經(jīng)過年齡、性別、BMI、腰臀比校正，Sfrp5仍可作為一個(gè)獨(dú)立的變量與胰島素抵抗呈顯著負(fù)相關(guān)(β=-0.425，P＜0.001)。
　　 結(jié)論：