選擇性殺傷癌胚抗原陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的條件復(fù)制型腺病毒載體的構(gòu)建和應(yīng)用.pdf

1、上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文選擇性殺傷癌胚抗原陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的條件復(fù)制型腺病毒載體的構(gòu)建和應(yīng)用姓名：王夢(mèng)筠申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：黃倩20090501上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文共轉(zhuǎn)染Ad293細(xì)胞，包裝重組腺病毒Ad.CEAE1ACMVTK。采用Ad.CEAE1ACMVTK分別感染CEA陽(yáng)性和陰性腫瘤細(xì)胞后，通過(guò)檢測(cè)E1A表達(dá)及病毒增殖，評(píng)價(jià)該病毒能否在CEA陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞中選擇性復(fù)制；顯微鏡觀察被感染細(xì)胞的病變情況

2、、CCK8檢測(cè)被感染細(xì)胞的生存率，評(píng)價(jià)該病毒是否能夠選擇性殺傷CEA陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞；最后聯(lián)合使用該病毒及前藥GCV，觀察前藥GCV與該腺病毒載體間是否具有協(xié)同作用。結(jié)果：pCEAEGFPLuc轉(zhuǎn)染CEA陽(yáng)性的Lovo和陰性的Ad293細(xì)胞后，EGFP的陽(yáng)性率分別為15.6%和0.53%；在Lovo細(xì)胞中，Luciferase酶的活性是Ad293細(xì)胞的4x102倍，表明分離到的CEA啟動(dòng)子具有較好的選擇性。與目前廣泛應(yīng)用的、組成性表達(dá)的、強(qiáng)

3、病毒啟動(dòng)子CMV調(diào)控的pCMVEGFPLucN1轉(zhuǎn)染結(jié)果比較，CEA啟動(dòng)子調(diào)控的pCEAEGFPLuc其EGFP的陽(yáng)性率是CMV的0.6倍，而luciferase的活性是CMV的0.36倍，表明CEA啟動(dòng)子的活性也是相對(duì)較高的。采用空斑形成實(shí)驗(yàn)（plaquefmingunit，PFU）比較野生型腺病毒dl309與Ad.CEAE1ACMVTK在CEA陽(yáng)性及陰性細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制效率差異，在CEA陽(yáng)性的腫瘤細(xì)胞中dl309與Ad.CEAE1ACM