結(jié)腸癌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞相互作用中腫瘤細(xì)胞IGFBP7表達(dá)與Wnt信號(hào)通路.pdf

1、結(jié)直腸癌由于其發(fā)病率高和預(yù)后差目前仍是嚴(yán)重危害人類健康的常見(jiàn)消化系統(tǒng)惡性腫瘤。近年來(lái)隨著腫瘤微環(huán)境理論逐漸受到人們的重視，腫瘤和間質(zhì)的相互作用亦成為腫瘤研究熱點(diǎn)。越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)研究表明，腫瘤細(xì)胞周?chē)g質(zhì)可能會(huì)分泌某種因子影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展；病理學(xué)家已經(jīng)注意到，在結(jié)直腸癌組織中，癌巢周?chē)霈F(xiàn)明顯的促纖維組織增生，提示在結(jié)直腸癌中腫瘤間質(zhì)細(xì)胞尤其是成纖維細(xì)胞在腫瘤發(fā)生發(fā)展發(fā)揮著重要的作用。
　　 IGFBP7(Insulin-lik

2、egrowthfactorbindingprotein7)即胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白7，是我們實(shí)驗(yàn)室首次在結(jié)腸腺癌-正常粘膜的差減文庫(kù)中篩選出來(lái)的抑癌基因，是一種分泌型蛋白，可以抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，與病人良好預(yù)后呈正相關(guān)。我們前期研究表明，結(jié)腸癌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞相互作用能促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞IGFBP7表達(dá)，促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化。
　　 目前研究表明Wnt信號(hào)通路是結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一，那么這個(gè)信號(hào)通路是否參與

3、了結(jié)腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞的相互作用并直接影響IGFBP7的表達(dá)?這正是我們的研究目標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)采用RT-PCR、Real-timePCR、Westernblotting等方法，首先在腫瘤細(xì)胞和成纖維細(xì)胞相互作用模型(雙層共培養(yǎng)和條件共培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)模型)中證實(shí)相互作用時(shí)腫瘤細(xì)胞IGFBP7表達(dá)升高。接著，通過(guò)分別加入Wnt通路的激動(dòng)劑LiCl和抑制劑DKK-1模擬腫瘤細(xì)胞IGFBP7表達(dá)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)加入LiCl后IGFBP7表達(dá)明顯下調(diào)，

4、加入DKK-1后IGFBP7表達(dá)明顯上升。同時(shí)，我們采用相同的方法檢測(cè)相互作用系統(tǒng)中Wnt信號(hào)通路相關(guān)靶基因如c-my和cyclinD1和相關(guān)蛋白如β-catenin和TCF4的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)靶基因和相關(guān)蛋白的表達(dá)均降低。
　　 我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明結(jié)腸癌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞相互作用中腫瘤細(xì)胞內(nèi)Wnt信號(hào)通路受到抑制，并且在腫瘤細(xì)胞中的IGFBP7高表達(dá)受Wnt信號(hào)通路的負(fù)性調(diào)節(jié)。
　　 通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)，我們得到以下結(jié)論：