基于壓電免疫生物傳感器的大腸桿菌O157：H7檢測(cè)方法研究.pdf

1、大腸桿菌O157：H7作為食源性致病菌存在流行暴發(fā)的可能性和感染的嚴(yán)重性，急需研制一種快速準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。本課題根據(jù)石英晶體微天平良好的質(zhì)量響應(yīng)特性，在QCM石英金電極表面采用四種不同的抗體固定方法，將抗體固定在電極表面，并通過兩種分析方法來(lái)檢測(cè)大腸桿菌O157：H7。根據(jù)不同濃度的菌體溶液響應(yīng)值存在規(guī)律性來(lái)測(cè)定菌體濃度。建立了基于QCM的壓電免疫生物傳感器的微生物檢測(cè)系統(tǒng)，能夠快速準(zhǔn)確的檢測(cè)大腸桿菌O157：H7。 本課題的主

2、要研究?jī)?nèi)容和研究結(jié)果如下： 1.采用四種抗體固定方法：硅烷固定法，聚乙烯亞胺固定法，3-巰基丙酸固定法和蛋白A固定法等將抗體固定于金電極表面，并通過兩種分析方法：氣相分析法和流動(dòng)注射法來(lái)跟蹤了解石英金電極表面每一步反應(yīng)的頻率變化。結(jié)果表明，蛋白A固定法與流動(dòng)注射法聯(lián)合使用是最佳的QCM檢測(cè)大腸桿菌O157：H7方法。 2.利用蛋白A固定法和流動(dòng)注射法聯(lián)合使用時(shí)，蛋白A濃度和抗體的濃度對(duì)結(jié)果有影響，實(shí)驗(yàn)證明蛋白A最佳濃度為

3、0.5mg/mL，抗體最佳濃度為1.0mg/mL。 3.選擇最佳的抗體固定方法和分析方法，通過頻率變化量的差異對(duì)不同濃度的大腸桿菌O157：H7溶液進(jìn)行定量檢測(cè)，檢測(cè)限為7.33×103CFU/mL，檢測(cè)范圍為7.33×103CFU/mL～7.33×108CFU/mL，在此范圍內(nèi)，其頻率變化值和濃度的響應(yīng)方程式為：Af=6.9LogC-10.5。以上實(shí)驗(yàn)研究，為今后壓電免疫生物傳感器在食品致病菌的檢測(cè)研究應(yīng)用打下基礎(chǔ)，為從事食品