嗜酸乳桿菌的益生潛能及其對大腸桿菌O157：H7的拮抗活性.pdf

1、食品安全的事件時有發(fā)生，由病原微生物污染所引發(fā)的食品質(zhì)量安全問題更是屢見不鮮，大腸桿菌O157∶H7作為常見的腸道病原微生物，感染者往往會出現(xiàn)痢疾、急性腸道炎癥、溶血性結(jié)腸炎和溶血性尿毒綜合癥等疾病。對于大腸桿菌O157∶H7的感染傳統(tǒng)的方法是服用抗生素，這不僅會使微生物產(chǎn)生抗藥性基因，并且抗性基因存在水平轉(zhuǎn)移的風險，加上抗生素的使用者往往還會出現(xiàn)抗生素相關性痢疾，即二次腹瀉，因此，急需替代的解決方案，目前一些乳酸菌能夠?qū)Σ≡T發(fā)疾病

2、起到預防及治療作用已經(jīng)受到廣泛認可，但芬蘭10年追蹤調(diào)查卻出現(xiàn)了乳酸菌相關的菌血癥，這使得乳酸菌對病原菌誘發(fā)疾病的預防及治療受到了限制，不過卻沒有出現(xiàn)一例與嗜酸乳桿菌相關的菌血癥。因此，本實驗以嗜酸乳桿菌為研究對象，同時以展示出對病原菌誘發(fā)疾病起到預防及治療作用的嗜酸乳桿菌NCFM作為參照，研究本實驗室的三株嗜酸乳桿菌是否對大腸桿菌O157∶H7誘發(fā)疾病的預防及治療具有應用前景。本課題首先通過形態(tài)學特性，16SrRNA基因和pheS基因

3、的系統(tǒng)發(fā)育分析對3株菌株進行鑒定;其次研究嗜酸乳桿菌對E.coli O157∶H7的抑菌活性和抑菌機理;再次研究嗜酸乳桿菌對E.coli O157∶H7的殺菌活性及其菌體之間是否存在接觸性依賴抑制;從次研究嗜酸乳桿菌是否能夠抑制E.coli O157∶H7對人體腸道上皮細胞的黏附作用;最后通過酸耐受性、膽鹽耐受性、Caco-2細胞的黏附和抗生素敏感性試驗及其抗炎癥效果（抗炎癥效果基于Caco-2細胞模型中能否降低大腸桿菌O157∶H7誘

4、發(fā)的IL-8的產(chǎn)生）來評價嗜酸乳桿菌的益生潛能。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴通過形態(tài)學特性，16SrRNA基因和pheS基因的保守序列進行系統(tǒng)發(fā)育分析，確定3株菌株都為嗜酸乳桿菌。嗜酸乳桿菌KLDS1.0901、1.0902、1.1003和NCFM對金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸桿菌ATCC25922、單核細胞增生李斯特菌CMCC54002、沙門氏菌ATCC14028和大腸桿菌O157∶H7均展示出了一定程度的抑制作用，對

5、大腸桿菌O157∶H7的抑菌圈直徑分別為11.20±0.10，12.60±0.80，11.23±0.15和10.20±0.92(mm)，起抑菌作用的物質(zhì)被證明來自于有機酸，乳酸和抑菌活性之間的R值為0.87，說明有機酸中的乳酸起主要抑菌活性的作用。并在以乳糖為唯一碳源時抑菌活性最強，抑菌圈直徑分別達到了13.43±1.00，14.33±2.32，14.10±1.99和13.43±1.12(mm)。⑵嗜酸乳桿菌的無細胞發(fā)酵上清液對大腸桿菌

6、O157∶H7也具有較強的殺菌活性，107 CFU大腸桿菌O157∶H7在無細胞發(fā)酵上清液培養(yǎng)2h，均沒有活的大腸桿菌O157∶H7被檢出，殺菌活性也被證明和有機酸的產(chǎn)生有關。但嗜酸乳桿菌菌體本身和大腸桿菌O157∶H7不存在接觸性依賴抑制，大腸桿菌O157∶H7單獨培養(yǎng)18 h的活菌數(shù)為227.7±14.6 CFU，而與KLDS1.0901，KLDS1.0902，KLDS1.1003或者NCFM共培養(yǎng)情況下，大腸桿菌O157∶H7的活

7、菌數(shù)依次為225.3±18.9 CFU(P=0.82)，242.3±6.1 CFU(P=0.18)，249.0±2.6 CFU(P=0.06)和231.0±12.9 CFU(P=0.70)，互相之間沒有展示出顯著性差異（P＞0.05）。⑶在抑制大腸桿菌O157∶H7對人體腸道上皮細胞黏附作用方面，在競爭性試驗和排斥性試驗，4株嗜酸乳桿菌都展示了較強的抑制大腸桿菌O157∶H7對Caco-2的黏附能力。在置換性試驗，沒有展示出顯著性差異(