杉木材質(zhì)相關(guān)MYB基因的表達(dá)及功能研究.pdf

1、轉(zhuǎn)錄因子近年來已成為分子生物學(xué)研究的熱點(diǎn),通過特異性結(jié)合到靶基因調(diào)控區(qū)的順式作用元件上,調(diào)控靶基因的表達(dá)。MYB轉(zhuǎn)錄因子是植物最大的轉(zhuǎn)錄因子基因家族之一,在植物中起著重要的調(diào)控作用。杉木是我國南方重要的針葉速生用材樹種,用途廣泛。因此,本文以杉木為研究材料,在本課題組分離克隆了MYB轉(zhuǎn)錄因子基因的基礎(chǔ)上對其進(jìn)行了初步的功能分析。主要研究結(jié)果如下:
　　1.基于本課題組克隆的兩個杉木 MYB基因,亞細(xì)胞定位結(jié)果表明:sGFP-ClM

2、YB1定位于細(xì)胞核中,而sGFP-ClMYB2不僅定位于細(xì)胞核,在細(xì)胞膜以及細(xì)胞質(zhì)中的某些細(xì)胞器上也存在。
　　2.利用實(shí)時定量 PCR對這兩個基因的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測,結(jié)果表明:在六種不同的器官中,ClMYB1主要在針葉和木質(zhì)化莖中表達(dá),在其他器官的表達(dá)量都很低;而ClMYB2主要在根和木質(zhì)化莖中表達(dá),在雌花中的表達(dá)量最低。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn):ClMYB1與ClMYB2有著類似的表達(dá)模式,都主要在木質(zhì)化的莖中表達(dá),且隨著木質(zhì)化程度

3、的增高表達(dá)量增加。在ClMYB1、ClMYB2與12個杉木木質(zhì)素合成相關(guān)酶基因的協(xié)同表達(dá)分析中,ClMYB1與 ClCCoAOMT1、ClPAL3呈顯著正相關(guān),ClMYB2與ClCCoAOMT1、ClPAL3呈極顯著正相關(guān),與ClCOMT、ClCCR1呈顯著正相關(guān),這些結(jié)果表明,ClMYB1、ClMYB2可能通過正調(diào)控ClCCoAOMT1和ClPAL3基因來參與杉木木材的形成。
　　3.組織原位雜交技術(shù)研究ClMYB1、ClMYB

4、2在不同組織中的表達(dá),結(jié)果表明:ClMYB1主要在杉木嫩葉的維管組織中表達(dá),ClMYB2主要在根的木質(zhì)部中表達(dá),在嫩葉的維管組織中稍有表達(dá),表達(dá)信號不強(qiáng)烈。ClMYB1、ClMYB2都主要在木質(zhì)化莖的木質(zhì)部中表達(dá)。
　　4.異源轉(zhuǎn)化本生煙草:經(jīng)表型觀測,轉(zhuǎn)基因煙草葉片比對照小,但質(zhì)感厚實(shí),顏色比對照的深,葉邊緣褶皺,葉柄更硬挺。Wiesner染色實(shí)驗(yàn)表明:轉(zhuǎn)基因煙草第二節(jié)莖切片跟對照沒有差別都沒有顏色,而第四、六節(jié)莖木質(zhì)部的顏色都