耐輻射球菌PprI蛋白細(xì)胞毒性及免疫毒性的研究.pdf

1、目的：
　　pprI基因是耐輻射球菌中的特有基因，被認(rèn)為是耐輻射球菌DNA修復(fù)與保護(hù)途徑的總開關(guān)，基因的表達(dá)產(chǎn)物PprI蛋白是一種促進(jìn)DNA修復(fù)的多效蛋白的誘導(dǎo)物。近年來我科室研究人員研究證實(shí)pprI基因轉(zhuǎn)染對哺乳動物中子和γ射線急性放射損傷具有顯著的防治作用，原核表達(dá)純化取得的PprI蛋白，也被證實(shí)對γ射線輻射損傷小鼠具有一定的抗放作用。本課題在此蛋白作用機(jī)制的基礎(chǔ)上，對其細(xì)胞毒性及免疫毒性作了初步的研究，為其以后的臨床應(yīng)用前安

2、全性評價提供依據(jù)，目前關(guān)于此蛋白的毒性研究，尚未見國內(nèi)外文獻(xiàn)報道。
　　材料與方法：
　　PprI蛋白由本實(shí)驗(yàn)室張永芹碩士通過原核表達(dá)純化,以人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞為作用對象，應(yīng)用MTT法檢測PprI蛋白對細(xì)胞的增殖、毒性作用，采用細(xì)胞克隆法檢測該蛋白對輻射細(xì)胞存活的影響，并繪制出劑量存活曲線。以ICR小鼠作為免疫對象，實(shí)驗(yàn)組分為生理鹽水免疫組和PprI蛋白免疫組，通過免疫器官臟器系數(shù)及T淋巴細(xì)胞亞群變化觀察此蛋白對小鼠免疫功

3、能的影響。
　　結(jié)果：
　　本課題初步研究得出，PprI蛋白濃度為2.5、5、10ug/ml范圍內(nèi)對細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用，且抑制作用與蛋白濃度呈正相關(guān)，細(xì)胞密度0.5×104作用時間24h的細(xì)胞半抑制率IC50為6.40ug/mL。照射劑量為6Gy時，PprI蛋白濃度為100、200、400、600ng/ml范圍內(nèi)對細(xì)胞產(chǎn)生增殖作用，蛋白濃度400ng/mL作用36h時增殖作用最為顯著。由多靶單擊模型擬合的細(xì)胞存活曲線得知，Pp

4、rI蛋白組D0值為1.33，Dq值為1.17，N值為2.41，SF2值為0.51，各值均高于單純照射組。在小鼠免疫及免疫后三周的觀察期間內(nèi)，計算免疫器官臟器系數(shù)可知，免疫初期即初次免疫后14天，高劑量組腎臟重量系數(shù)顯著低于生理鹽水對照組（P＜0.05)，中、高劑量組胸腺重量系數(shù)均顯著高于生理鹽水對照組（P＜0.05)；免疫末期即末次免疫后3天，低劑量組腎臟重量系數(shù)顯著低于生理鹽水對照組（P＜0.05)，高劑量組胸腺重量系數(shù)顯著高于生理鹽

5、水對照組（P＜0.05)；恢復(fù)期即末次免疫后3周，高劑量組肝臟重量系數(shù)顯著高于生理鹽水對照組（P＜0.05)，低劑量組胸腺重量系數(shù)顯著高于生理鹽水對照組（P＜0.05)。由T淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果可知，末次免疫后3天，中劑量組小鼠脾臟CD3+T細(xì)胞含量顯著高于生理鹽水對照組（P<0.05），高劑量組CD3+CD8+T細(xì)胞含量顯著高于生理鹽水對照組（P<0.05），高劑量組CD4/CD8比值顯著低于生理鹽水對照組（P<0.05）。
　

6、　結(jié)論：
　　1.研究得知PprI蛋白濃度達(dá)到2.5、5、10ug/ml時對細(xì)胞增殖產(chǎn)生抑制作用，且抑制作用與蛋白濃度呈正相關(guān)，細(xì)胞密度0.5×104作用時間24h的細(xì)胞半抑制率IC50為6.40ug/mL。PprI蛋白濃度為100、200、400、600ng/ml時對細(xì)胞產(chǎn)生增殖作用，蛋白濃度400ng/mL作用36h時增殖作用最為顯著。
　　2.由多靶單擊模型擬合劑量存活曲線及所得放射生物學(xué)參數(shù)得知，PprI蛋白可以使細(xì)

7、胞的平均致死劑量增大，放射抗拒性增強(qiáng)，細(xì)胞修復(fù)能力增強(qiáng)。
　　3.PprI蛋白對小鼠免疫器官的影響主要表現(xiàn)在中樞免疫器官胸腺及主要臟器腎臟，且刺激具有可逆性。對脾臟、肝臟基本無毒性作用。
　　4．PprI蛋白一定程度上可以提高小鼠脾臟CD3+T細(xì)胞和CD3+CD8+T細(xì)胞的比例，增強(qiáng)免疫功能。對T淋巴細(xì)胞活性無明顯影響。
　　5．本文研究結(jié)果提示，PprI蛋白可以使小鼠免疫功能增強(qiáng)，對小鼠免疫器官基本無毒性作用，為該蛋