含藥血清對體外培養(yǎng)早期人膝骨關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞COX-2mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的:本實驗通過探討含藥血清對體外培養(yǎng)早期人膝骨關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞COX-2mRNA表達(dá)的影響,進(jìn)一步闡釋中藥復(fù)方化瘀祛濕方對早期膝 OA治療的作用機(jī)制,能相應(yīng)地反映出中藥復(fù)方化瘀祛濕方的作用靶點,以期為中藥復(fù)方治療膝骨關(guān)節(jié)炎提供可靠的實驗理論基礎(chǔ)。
　　方法:選擇成年健康新西蘭大耳白兔48只,雌雄各半,予編號,按隨機(jī)數(shù)字表法抽取24只分成4組,每組6只:A組(生理鹽水組)、B組(補(bǔ)腎活血組)、C組(化瘀祛濕組)、D組(塞來昔

2、布組)。手術(shù)切斷膝關(guān)節(jié)前交叉韌帶和內(nèi)側(cè)副韌帶建立兔膝 OA退行性變模型。造模成功后4周[1],開始喂藥。按人和動物體表面積比計算動物等效給藥量,確定每天的劑量。生理鹽水對照組灌以等量生理鹽水。連續(xù)灌胃7天,均按標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)環(huán)境自然喂養(yǎng)。在最后一次全天藥量灌胃90min后,經(jīng)烏拉坦麻醉后取兔耳緣靜脈穿刺采血,4℃過夜,2500r/min離心25min,取血清0.22μm濾膜抽濾、分裝,56℃、30min滅活、-20℃保存?zhèn)溆?。將收集的早期膝?/p>

3、關(guān)節(jié)炎患者滑膜組織(根據(jù)Kellgren和Lawrence的X線診斷標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ-Ⅱ級)12例。經(jīng)分離、純化滑膜組織,原代成纖維樣滑膜細(xì)胞培養(yǎng)至四代的成纖維樣滑膜細(xì)胞(FLS)用于實驗,依次分別加入含生理鹽水的血清DMEM培養(yǎng)基,含補(bǔ)腎活血方含藥血清的DMEM培養(yǎng)基,含化瘀祛濕方含藥血清的DMEM培養(yǎng)基,含塞來昔布含藥血清的DMEM培養(yǎng)基,連續(xù)培養(yǎng)24h[2]。重復(fù)離心后,-20℃凍存待測。應(yīng)用實時熒光定量(RT-PCR)檢測四組含藥血清干

4、預(yù)后的早期膝骨關(guān)節(jié)炎患者成纖維樣滑膜細(xì)胞中的COX-2mRNA的表達(dá)水平。所得資料應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,以α=0.05作為檢驗標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果:(1)所有的早期膝骨關(guān)節(jié)炎患者成纖維樣滑膜細(xì)胞經(jīng)不同含藥血清干預(yù)后均能檢測到COX-2mRNA。(2)采用2-ΔΔCt進(jìn)行相對表達(dá)量分析,生理鹽水組的COX-2mRNA表達(dá)水平最高,與塞來昔布組、化瘀祛濕組及補(bǔ)腎活血組比較有明顯差異(P<0.05)。(3)含藥血清組間

5、比較:化瘀祛濕組與塞來昔布組兩組間的COX-2mRNA表達(dá)量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),而以上兩組與補(bǔ)腎活血組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:(1)所有的早期(Ⅰ-Ⅱ級)膝骨關(guān)節(jié)炎患者成纖維樣滑膜細(xì)胞經(jīng)不同含藥血清干預(yù)后均能降低 COX-2mRNA的表達(dá)水平。(2) COX-2mRNA作為早期骨關(guān)節(jié)炎炎癥途徑的發(fā)生、發(fā)展過程中一個可能潛在的啟動因子,而早期使用中藥復(fù)方化瘀祛濕方對早期膝 OA患者成纖維