pSecTag-TAT-Bcl2l1質(zhì)粒載體的構(gòu)建與表達.pdf

1、越來越多的研究提示內(nèi)皮細胞凋亡在一些血管疾病(如血管術(shù)后再狹窄、動脈粥樣硬化)的發(fā)生、發(fā)展過程中起到重要的作用。抑制內(nèi)皮細胞凋亡，可能對加快受損血管內(nèi)皮層的修復(fù)以及預(yù)防和治療動脈粥樣硬化具有重要意義。Bcl-xl/Bc1211蛋白作為抗凋亡蛋白在內(nèi)皮細胞凋亡調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，因此，Bcl-xl基因治療抗內(nèi)皮細胞凋亡是一種可行的策略。通過分泌信號肽和穿膜肽序列修飾Bcl-xl基因，可能使編碼的Bcl-xl蛋白具有分泌和穿膜功能，而增

2、加Bcl-xl基因治療抗內(nèi)皮細胞凋亡的效果。
　　 目的：
　　 構(gòu)建攜帶經(jīng)信號肽和穿膜肽序列修飾的Bcl-xl基因的真核表達質(zhì)粒載體pSecTag-TAT-Bc1211，并檢測其轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細胞后，融合蛋白的表達情況，為進一步研究融合蛋白功能及Bcl-xl基因治療對內(nèi)皮細胞抗凋亡的作用做前期準(zhǔn)備。
　　 材料和方法：
　　 1.利用pSecTag2A質(zhì)粒構(gòu)建攜帶經(jīng)信號肽和穿膜肽序列修飾的Bcl-xl基因的表

3、達型質(zhì)粒載體pSecTag-TAT-Bc1211。
　　 2.LipofectmineTM2000和EntransterTM-D介導(dǎo)的pSecTag-TAT-Bc1211轉(zhuǎn)染EA.hy926細胞。
　　 3.pSecTag-TAT-Bcl211轉(zhuǎn)染EA.hy926和293-T細胞，WestonBlot檢測Igκ-chainLeader-TAT-Bcl211融合蛋白的表達。
　　 結(jié)果：
　　 1.成功構(gòu)建

4、pSecTag-TAT-Bc1211質(zhì)粒。
　　 2.LipofectmineTM2000介導(dǎo)的pSecTag-TAT-Bcl211轉(zhuǎn)染EA.hy926細胞，最高轉(zhuǎn)染率為30％；LipofectnuneTM2000介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于EntransterTM-D。
　　 3.在經(jīng)pSecTag-TAT-Bc1211轉(zhuǎn)染的EA.hy926和293-T細胞內(nèi)，WestonBlot檢測到Igκ-chainLeader-TAT-B