Cx36及Pannexin-1在NADPH氧化酶抑制劑apocynin抗大鼠腦缺血再灌注損傷作用中的機制.pdf

1、目的：探討Cx36及Pannexin-1在NADPH氧化酶抑制劑apocynin抗大鼠腦缺血再灌注損傷作用中的機制。
　　方法：
　　1.利用大鼠大腦中動脈栓塞（MCAO）法制備大鼠局灶性腦缺血/再灌注（I/R）損傷的動物模型；60只雄性SD大鼠隨機分為4組：假手術(shù)組（sham）組，I/R組，I/R+NADPH氧化酶抑制劑 apocynin（I/R+Apo）組、I/R+apocynin+PKC激酶抑制劑 GF109203X（

2、I/R+Apo+GF）組。Longa5分法對大鼠進行神經(jīng)行為學(xué)評分；TTC染色法檢測大鼠腦梗死體積的變化；TUNEL染色法檢測大鼠腦組織中的細胞凋亡情況；Western Blotting法檢測Cx36、Pannexin-1、PKC以及凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2的蛋白表達變化。化學(xué)熒光法、WST-1法、TBA法以及微量酶標法分別檢測大鼠腦組織中ROS、SOD、MDA、GSH的含量。
　　2.利用原代培養(yǎng)的神經(jīng)元細胞，制備缺氧/復(fù)

3、氧（H/R）損傷的細胞模型。研究中，將神經(jīng)元細胞分為正常對照（control）組、H/R組、H/R+apocynin（H/R+Apo）組、H/R+apocynin+GF109203X（H/R+Apo+GF）組。MTT法檢測神經(jīng)元細胞存活率；Hoechst33258檢測神經(jīng)元細胞凋亡情況；Western Blotting檢測 Cx36、Pannexin-1、PKC以及凋亡相關(guān)蛋白 Bax、Bcl-2的蛋白表達變化。
　　結(jié)果：

4、>　　1.大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分、腦梗死體積百分率以及腦組織細胞凋亡的檢測結(jié)果顯示，與sham組相比，I/R組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分，腦梗死體積百分率和TUNEL陽性細胞率顯著增高。與 I/R組相比，I/R+Apo組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分，腦梗死體積百分率和TUNEL陽性細胞率顯著降低。與I/R+Apo組相比，I/R+Apo+GF組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分，腦梗死體積百分率以及TUNEL陽性細胞率則顯著增高。
　　2.大鼠腦組織中Cx36、Pann

5、exin-1、PKC、Bax、Bcl-2蛋白表達變化的檢測結(jié)果顯示，與sham組相比，I/R組大鼠腦組織中Cx36、Pannexin-1、PKC蛋白表達水平顯著降低，凋亡相關(guān)蛋白Bax與Bcl-2的比值顯著增高。與I/R組相比， I/R+Apo組大鼠腦組織中Cx36、Pannexin-1、PKC蛋白表達顯著增高，Bax與Bcl-2的比值顯著降低。與I/R+Apo組相比，I/R+Apo+GF組大鼠腦組織中Cx36、Pannexin-1、P

6、KC蛋白表達水平顯著降低，Bax與Bcl-2的比值顯著增高。
　　3.大鼠腦組織中ROS、SOD、MDA、GSH的含量進行檢測的實驗結(jié)果表明，與sham組相比，I/R組大鼠腦組織中 ROS、MDA的含量顯著增高，而 SOD和GSH的含量顯著降低。與 I/R組相比，I/R+Apo組大鼠腦組織中 ROS、MDA的含量顯著降低， SOD和 GSH的含量顯著增高。與 I/R+Apo組相比， I/R+Apo+GF組大鼠腦組織中 ROS、MD

7、A的含量有所增高，而 SOD和 GSH的含量則有所降低。
　　4.神經(jīng)元細胞存活率與細胞凋亡率的檢測結(jié)果顯示，與control相比，H/R組神經(jīng)元細胞存活率明顯降低，細胞凋亡率顯著增加。與H/R組相比，H/R+Apo組神經(jīng)元細胞存活率顯著增高，細胞凋亡率顯著降低。與 H/R+Apo相比， H/R+Apo+GF組神經(jīng)元細胞存活率明顯降低，細胞凋亡率顯著增加。
　　5.神經(jīng)元縫隙連接功能的檢測結(jié)果顯示，與control相比，H/

8、R組神經(jīng)元縫隙連接功能顯著降低。與H/R組相比，H/R+Apo組神經(jīng)元縫隙連接功能顯著增強。與H/R+Apo相比，H/R+Apo+GF組神經(jīng)元縫隙連接功能顯著減弱。
　　6.神經(jīng)元細胞中Cx36、Pannexin-1、PKC、Bax、Bcl-2蛋白表達變化的檢測結(jié)果顯示，與control相比，H/R組神經(jīng)元細胞Cx36、Pannexin-1、PKC蛋白表達水平顯著降低，凋亡相關(guān)蛋白 Bax與 Bcl-2的比值顯著增高。與 H/R組

9、相比， H/R+Apo組神經(jīng)元細胞中Cx36、Pannexin-1、PKC蛋白表達顯著增高，Bax與Bcl-2的比值顯著降低。與H/R+Apo相比，H/R+Apo+GF組神經(jīng)元細胞中Cx36、Pannexin-1、PKC蛋白表達顯著降低，Bax與Bcl-2的比值顯著增高。
　　結(jié)論：
　　1. NADPH氧化酶抑制劑 apocynin對腦 I/R損傷的保護作用可能與 Cx36、Pannexin-1的蛋白表達增高有關(guān)。