人CYP2C8多態(tài)性功能及CYP2C8基因依賴性藥物相互作用的體外研究.pdf

1、目的：CYP2C8基因多態(tài)性是造成個(gè)體間CYP2C8的藥物代謝能力產(chǎn)生巨大差異的因素之一。主要CYP2C8基因多態(tài)性功能的系統(tǒng)性研究，具有重要的藥理學(xué)和毒理學(xué)意義，可為CYP2C8代謝表型預(yù)測(cè)和經(jīng)CYP2C8代謝藥物的個(gè)體化用藥提供數(shù)據(jù)和信息。但目前仍缺乏在統(tǒng)一的CYP表達(dá)體系和相同的檢測(cè)系統(tǒng)中，研究CYP2C8重要等位基因功能的相關(guān)報(bào)道。CYP2C8藥物代謝能力的個(gè)體差異可能會(huì)導(dǎo)致攜帶CYP2C8多態(tài)性基因型的患者，對(duì)CYP2C8介導(dǎo)

2、的代謝性藥物相互作用的敏感性增加，而導(dǎo)致惡性藥物毒副作用。現(xiàn)階段，尚未有研究證明CYP2C8基因多態(tài)性是否會(huì)影響藥物間相互作用的發(fā)生和機(jī)制，以及能否會(huì)引起藥物相互作用的個(gè)體差異。本課題研究中，我們針對(duì)CYP2C8主要基因多態(tài)性功能改變，以及CYP2C8基因型依賴的藥物相互作用等尚未解決的科學(xué)問(wèn)題展開(kāi)系統(tǒng)研究和分析。
　　 方法：首先，選取野生型CYP2C8(CYP2C8.1)，3個(gè)重要的CYP2C8等位基因(CYP2C8.2，C

3、YP2C8.3，CYP2C8.4)以及CYP2C8.3攜帶的兩個(gè)重要SNPs(R139和K399R)，應(yīng)用體外重組和蛋白表達(dá)技術(shù)，將CYP2C8.1和5種CYP2C8變異體于相同的表達(dá)體系中進(jìn)行表達(dá)，構(gòu)建涵蓋主要CYP2C8多態(tài)性的CYP2C8多態(tài)性基因文庫(kù)和蛋白文庫(kù)；利用已構(gòu)建成功的CYP2C8多態(tài)性蛋白文庫(kù)，研究體外重組CYP2C8.1和5種重要CYP2C8突變體對(duì)抗腫瘤藥物(紫杉醇)和抗瘧疾藥物(阿莫地奎)代謝功能的差異，在此基礎(chǔ)

4、上系統(tǒng)性分析CYP2C8基因多態(tài)性對(duì)CYP2C8酶學(xué)性質(zhì)改變的效應(yīng)關(guān)系。在系統(tǒng)性分析了CYP2C8多態(tài)性功能的基礎(chǔ)上，我們?cè)u(píng)估了10類(lèi)共27種臨床常用藥物對(duì)CYP2C8.1和5種CYP2C8突變體紫杉醇催化活性的抑制程度，并根據(jù)體外抑制數(shù)據(jù)預(yù)測(cè)受測(cè)藥物和紫杉醇，在不同CYP2C8基因型中，體內(nèi)藥物間相互作用的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。其次，我們初步建立了一種基于熒光底物的，針對(duì)于CYP2C8介導(dǎo)的代謝性藥物相互作用的高通量檢測(cè)方法，用于快速評(píng)估藥物或新

5、藥候選化合物對(duì)不同CYP2C8多態(tài)性的體外抑制程度。
　　 結(jié)果：對(duì)CYP2C8野生型及其5種突變體的功能研究表明：1、CYPs體外重組技術(shù)可應(yīng)用于CYP多態(tài)性功能研究和體外藥物代謝機(jī)制研究；2、CYP2C8體外代謝紫杉醇和阿莫地奎的研究顯示，本系統(tǒng)表達(dá)純化的CYP2C8.1具有正常的藥物催化活性，獲得的酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)Km與已有報(bào)道數(shù)據(jù)相近。3、與CYP2C8.1相比，R139K的藥物代謝能力無(wú)顯著變化，CYP2C8.2，CYP2

6、C8.3，CYP2C8.4和K399R的藥物代謝能力有不同程度的降低，其中K399R的代謝能力最低。藥物相互作用研究表明：1、紫杉醇和受測(cè)藥物的體外藥物相互作用研究結(jié)果顯示，受測(cè)藥物對(duì)CYP2C8突變體的半數(shù)抑制常數(shù)(IC50)，與CYP2C8.1相比存在明顯差異，CYP2C8基因多態(tài)性可能對(duì)CYP2C8介導(dǎo)的代謝性藥物相互作用產(chǎn)生影響；2、紫杉醇和受測(cè)藥物間體內(nèi)相互作用的預(yù)測(cè)結(jié)果顯示，不同CYP2C8基因型可能導(dǎo)致體內(nèi)相互作用性質(zhì)的改

7、變。3、基于體外重組CYPs和熒光底物的高通量藥物抑制檢測(cè)方法可以用于體外藥物相互作用的快速檢測(cè)和初步研究；
　　 總結(jié)：本研究從CYP2C8藥物代謝功能和CYP2C8抑制介導(dǎo)的代謝性藥物相互作用兩方面，研究了CYP2C8基因多態(tài)性的影響效應(yīng)。系統(tǒng)性分析CYP2C8多態(tài)性功能將為CYP2C8表型預(yù)測(cè)，為經(jīng)CYP2C8代謝的藥物，尤其是紫杉醇和阿莫地奎的個(gè)體化用藥提供更加均一化的數(shù)據(jù)和信息。紫杉醇和27種臨床常用藥物相互作用研究將