NAT2、CYP2C19基因多態(tài)性與抗結(jié)核治療藥物個(gè)體化肝損傷的研究.pdf

1、背景：
　　結(jié)核病(Tuberculosis，TB)，一種由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)感染引起的嚴(yán)重危害人類健康的慢性呼吸道傳染病。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)報(bào)道，每年約有800萬新增患者感染，且至少有300萬人死于該病，我國(guó)結(jié)核病年發(fā)病人數(shù)約為130萬，死亡人數(shù)達(dá)13萬，超過其它傳染病死亡人數(shù)的總和，嚴(yán)重威脅著國(guó)人健康。目前對(duì)結(jié)核病采取早期、規(guī)律、全程、適量、聯(lián)合五項(xiàng)原則進(jìn)行治療，核心的抗結(jié)

2、核治療方案為結(jié)核病四聯(lián)標(biāo)準(zhǔn)化療方案，即異煙肼(Isoniazid，INH)、利福平（Rifampicin，RFP）、吡嗪酰胺(Pyrazinamide，PZA)、乙胺丁醇(Ethambutol，EMB)聯(lián)合用藥，該方案最大的副作用是導(dǎo)致患者出現(xiàn)急慢性的肝損傷、皮疹等不良反應(yīng)，抗結(jié)核藥物引起的藥物性肝臟損傷（Antituberculosisdrug-induced liver injury，ATDILI）甚至導(dǎo)致患者死亡，所以對(duì)抗結(jié)核藥物

3、引起的肝損傷的研究有助于指導(dǎo)個(gè)體化治療和降低醫(yī)療費(fèi)用，尤其是對(duì)抗結(jié)核藥物引起的肝臟損傷機(jī)制和影響因素的研究對(duì)于預(yù)防此類醫(yī)源性的肝損傷有著非常重要的意義。
　　近年來，許多研究都表明抗結(jié)核藥物的相關(guān)代謝酶的代謝能力多態(tài)性對(duì)于抗結(jié)核藥物引起的肝損傷是至關(guān)重要的，而這種多態(tài)性主要是由藥物代謝酶的編碼基因多態(tài)性所決定的。本課題瞄定N-乙?；D(zhuǎn)移酶2(NAT2)和細(xì)胞色素酶P4502C19(CYP2C19)兩種在抗結(jié)核藥物代謝中起著重要作用

4、的酶，其基因多態(tài)性與ATDILI關(guān)聯(lián)性研究，試圖揭示個(gè)體化藥物性肝臟損傷的分子機(jī)制。
　　目的：
　　建立焦磷酸測(cè)序法分析NAT2和CYP2C19的6個(gè)位點(diǎn)突變的檢測(cè)方法，探討NAT2和CYP2C19基因多態(tài)性與ATDILI的相關(guān)性，以及影響ATDILI的其他因素;分析NAT2和CYP2C19基因多態(tài)性下患者肝損傷相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)異常情況，試圖揭示個(gè)體化藥物性肝臟損傷的分子機(jī)制以指導(dǎo)臨床實(shí)踐。
　　方法：
　　以2

5、012年8月至2013年11月期間在溫州市中心醫(yī)院就診使用四聯(lián)標(biāo)準(zhǔn)化療方案進(jìn)行治療的初治肺結(jié)核患者為對(duì)象，選取發(fā)生藥物性肝損者41例（肝損組），未出現(xiàn)藥物性肝損傷患者88例（對(duì)照組）。用焦磷酸測(cè)序法(Pyrosequencing)檢測(cè)兩組患者NAT2基因4個(gè)突變位點(diǎn)和CYP2C19基因2個(gè)突變位點(diǎn)，同時(shí)收集患者臨床資料（包括性別、年齡、身高、體重、酗酒史）、實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)（乙型肝炎病毒表面抗原、肝功能等），分析抗結(jié)核藥物引起的肝臟損傷與NA

6、T2和CYP2C19基因多態(tài)性相關(guān)性及其他相關(guān)因素。
　　結(jié)果：
　　1.組間NAT2和CYP2C19基因的6個(gè)SNP頻率比較，NAT2(C282T)在肝損組中發(fā)生頻率(61％)較對(duì)照組(38.6％)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，OR值為2.4; NAT2(G590A)在肝損組中發(fā)生頻率(37.8％)較對(duì)照組(22.2％)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，OR值為2.1;其他四個(gè)SNP頻率在兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、(P＞0.05)。
　　2.兩組間NAT2基因型比較，NAT2*4/4基因型患者不易發(fā)生ATDILI(P＜0.01，OR=0.3，95％ CI0.09-0.72);而兩組間NAT2乙?；蛐捅容^，快乙?；蛐突颊卟灰装l(fā)生ATDILI(P＜0.01，OR=0.3，95％ CI0.11-0.75)，慢乙?；蛐突颊吒装l(fā)生ATDILI(P＜0.01，OR=3.0，95％ CI1.36-6.81)。
　　3.兩組間CYP2C19*

8、2、*3基因型比較，CYP2C19*2、*3突變型(GA+AA)患者與CYP2C19*2、*3野生型(GG)患者發(fā)生ATDILI無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);而兩組間CYP2C19代謝基因型比較，快代謝型患者不易發(fā)生ATDILI(P＜0.05，OR=0.4，95％ CI0.20-0.90)，中間代謝型患者更易出現(xiàn)ATDILI(P＜0.05,OR=2.9,95％ CI1.34-6.17)。
　　4.肝損組NAT2乙酰基因型構(gòu)成比與對(duì)

9、照組比較存在差異(P＜0.05)，肝損組以慢乙?；蛐蜑橹?43.9％);CYP2C19代謝基因型兩組構(gòu)成比存在差異(P＜0.05)，對(duì)照組以快代謝型為主(58％)，肝損組則以中間代謝型為主(58.5％)而快代謝型只占36.6％。
　　5.不同程度肝損傷組間的比較，NAT2中間乙?；蛐突颊呖赡苋菀壮霈F(xiàn)重癥肝損傷(P＜0.05，OR=6.2，95％ CI1.33-29.01);CYP2C19代謝基因型在不同肝損傷組不存在差異(P＞

10、0.05)。
　　6.NAT2、CYP2C19聯(lián)合基因型與ATDILI相關(guān)性分析，同時(shí)具有NAT2快乙?；蛐秃虲YP2C19快代謝型患者不易發(fā)生ATDILI(P＜0.01，OR=0.2，95％ CI0.10-0.59)，同時(shí)具有NAT2慢乙酰基因型和CYP2C19中間、慢代謝型患者更易發(fā)生ATDILI(P＜0.05, OR=3.2,95％ CI1.17-8.93)。
　　7.以NAT2乙?；蛐秃虲YP2C19代謝基因型聯(lián)

11、合分組的ALT、AST、ALP、GGT、TBIL、DBIL六項(xiàng)肝功能指標(biāo)上升最高值比較，ALT和AST最高值在同時(shí)具有NAT2快、中間乙酰基因型和CYP2C19快代謝型組與同時(shí)具有NAT2慢乙?；蛐秃虲YP2C19中間、慢代謝型組間存在差異（P均＜0.05）。
　　8.多因素分析顯示，NAT2乙?；蛐秃虲YP2C19代謝基因型是結(jié)核病患者進(jìn)行抗結(jié)核治療發(fā)生藥物性肝損的危險(xiǎn)因素，OR值分別為2.29(P＜0.01)和2.49(P

12、＜0.05)。
　　9.ROC曲線分析顯示，NAT2乙?；蛐秃虲YP2C19代謝基因型聯(lián)合分析較單獨(dú)分析對(duì)于預(yù)測(cè)結(jié)核病患者進(jìn)行抗結(jié)核治療發(fā)生ATDILI具有更好的價(jià)值(AuC=0.682，P=0.001)。
　　結(jié)論：
　　1.NAT2基因多態(tài)性和CYP2C19基因多態(tài)性與抗結(jié)核藥物引起的藥物性肝損傷有一定相關(guān)性，NAT2和CYP2C19在抗結(jié)核藥物代謝中起重要作用。
　　2.出現(xiàn)藥物性肝損傷患者中，NAT2中