甲狀旁腺素對(duì)小鼠造血系統(tǒng)損的改善作用.pdf

1、目的：主要研究具有明顯調(diào)節(jié)骨代謝作用的重組人甲狀旁腺素(Recombinant Human Parathyroid Hormone,rhPTH)藥物對(duì)造血系統(tǒng)損傷的保護(hù)作用。分為四個(gè)部分：①研究rhPTH對(duì)小鼠骨髓造血干細(xì)胞動(dòng)員的作用；②研究rhPTH對(duì)慢性苯中毒小鼠造血損傷的改善作用；③研究rhPTH對(duì)免疫誘導(dǎo)的急性再生障礙性貧血模型小鼠造血損傷的改善作用；④研究rhPTH對(duì)免疫誘導(dǎo)的慢性再生障礙性貧血小鼠造血損傷的改善作用。

2、　　 方法：⑴正常C57BL／6J小鼠分為兩組,rhPTH處理組連續(xù)7天接受80μg／kgrhPTH腹腔注射,生理鹽水對(duì)照組注射等容積生理鹽水,第8天采用血細(xì)胞分析儀檢測(cè)外周血細(xì)胞數(shù)量,用集落培養(yǎng)法測(cè)定外周血中的造血祖細(xì)胞,流式細(xì)胞儀分析外周血中CD34+細(xì)胞,ELISA法測(cè)定血清中粒細(xì)胞集落刺激因子(Granulocyte-Colony Stimulating Factor,G—CSF)和基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(StromalCell

3、Derived Factor1,SDF-1)。⑵皮下注射苯油混合液制作慢性苯中毒造血系統(tǒng)損傷模型,將模型小鼠隨機(jī)分為3組:生理鹽水治療組、40μg／kg rhPTH治療組和80μg／kg rhPTH治療組,每周5次腹腔注射相應(yīng)劑量rhPTH或生理鹽水,共給藥3周。使用外源性脾結(jié)節(jié)法檢測(cè)造血干細(xì)胞；集落培養(yǎng)法測(cè)定骨髓造血祖細(xì)胞；血細(xì)胞分析儀檢測(cè)外周血細(xì)胞數(shù)量；稱(chēng)重法測(cè)定脾臟系數(shù)。⑶DBA／2J小鼠淋巴結(jié)和胸腺的淋巴細(xì)胞以2:1比例混合,尾

4、靜脈注射于6.0 Gyγ射線照射的Balb／c小鼠,制作急性再生障礙性貧血模型。rhPTH治療組每周5次腹腔注射80μg／kg rhPTH,生理鹽水對(duì)照組注射等容積生理鹽水,從造模前2周至造模后1周,共計(jì)給藥3周。以CD34+細(xì)胞水平反映造血干細(xì)胞；以集落培養(yǎng)法檢測(cè)骨髓造血祖細(xì)胞；血細(xì)胞分析儀測(cè)定外周血細(xì)胞數(shù)量:稱(chēng)重法測(cè)定脾臟系數(shù)。⑷DBA／2J小鼠的單純淋巴結(jié)細(xì)胞,尾靜脈注射于5.0 Gyγ射線照射的Balb／c小鼠,制作慢性再生障礙

5、性貧血模型。rhPTH治療組每周5次腹腔注射80μg／kg rhPTH,對(duì)照組注射生理鹽水。在造模前1周開(kāi)始直到造模后33天,共計(jì)給藥6周。以CD34+細(xì)胞水平反映骨髓造血干細(xì)胞；集落培養(yǎng)法測(cè)定骨髓造血祖細(xì)胞；血細(xì)胞分析儀檢測(cè)外周血細(xì)胞數(shù)量；稱(chēng)重法測(cè)定脾臟系數(shù)；細(xì)胞周期反映骨髓細(xì)胞DNA增殖情況。
　　 結(jié)果：①經(jīng)80μg／kg rhPTH連續(xù)7天給藥的rhPTH處理組小鼠的外周血白細(xì)胞、外周血祖細(xì)胞以及外周血干細(xì)胞均顯著高于生

6、理鹽水對(duì)照組(p<0.05),而血清中G-CSF和SDF-1兩種細(xì)胞因子在兩組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。說(shuō)明rhPTH可以促進(jìn)骨髓造血干／祖細(xì)胞的動(dòng)員,但不是通過(guò)增加G-CSF和SDF-1介導(dǎo)的。②與生理鹽水對(duì)照治療組相比較,經(jīng)過(guò)rhPTH治療的慢性苯中毒小鼠的造血干細(xì)胞數(shù)顯著增加(p<0.05),而脾臟系數(shù)明顯降低(p<0.05)。但是反映造血干細(xì)胞進(jìn)一步分化的骨髓造血祖細(xì)胞以及外周血細(xì)胞數(shù)量在各組之間沒(méi)有顯著性差異。③模型小鼠較正常小鼠骨髓

7、造血干細(xì)胞、骨髓造血祖細(xì)胞、外周血細(xì)胞數(shù)量以及脾臟系數(shù)等明顯減少,說(shuō)明免疫誘導(dǎo)的急性再生障礙性貧血小鼠的模型制作成功。與生理鹽水對(duì)照治療組相比較,經(jīng)過(guò)rhPTH治療的急性再生障礙性貧血小鼠的造血干細(xì)胞比例顯著增高(p<0.05)；而其它指標(biāo)如骨髓造血祖細(xì)胞、外周血細(xì)胞數(shù)量和脾臟系數(shù)等無(wú)顯著性差異。④經(jīng)過(guò)rhPTH治療的慢性再生障礙性貧血模型小鼠的造血干細(xì)胞數(shù)量和脾臟系數(shù)顯著增高(p<0.05),并且反映骨髓細(xì)胞DNA分裂增殖能力的指標(biāo)S

8、-G2-M期的細(xì)胞比例明顯升高(p<0.05)；而骨髓造血祖細(xì)胞和外周血細(xì)胞數(shù)量并沒(méi)有顯著增加。
　　 結(jié)論：⑴rhPTH促進(jìn)骨髓造血干／祖細(xì)胞動(dòng)員,但沒(méi)有發(fā)現(xiàn)這種動(dòng)員作用是通過(guò)細(xì)胞因子G-CSF和SDF-1介導(dǎo)產(chǎn)生。⑵在三個(gè)造血損傷模型中,rhPTH明顯提高模型小鼠造血干細(xì)胞數(shù)量,但對(duì)進(jìn)一步分化的造血祖細(xì)胞以及外周血細(xì)胞無(wú)影響。⑶rhPTH對(duì)造血系統(tǒng)損傷具有一定的保護(hù)作用,其用藥劑量、給藥方案以及適用的疾病模型還需要進(jìn)一步研究