角質(zhì)形成細(xì)胞與黑素細(xì)胞體外構(gòu)建含黑素的組織工程皮膚.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：探索用人角質(zhì)形成細(xì)胞(Keratinocytes，KCs)和黑素細(xì)胞(Melanocytes，MCs)混合培養(yǎng)接種于去表皮的真皮(De-epidermized dermis，DED)，體外構(gòu)建含黑素的組織工程皮膚。
　　方法：1.采用兩步酶消化法處理健康小兒包皮，獲得表皮細(xì)胞懸液，分別用角質(zhì)形成細(xì)胞無血清培養(yǎng)基(keratinocytes-SFM)及改良的M254黑素細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)KCs、MCs。2.分別將KCs、MCs傳至

2、第3代，將KCs接種于培養(yǎng)瓶中，48h后加入MCs(MCs∶KCs為1∶10)混合培養(yǎng)。3.制備人去表皮的真皮(DED)，將培養(yǎng)第3代的MCs、KCs制成細(xì)胞懸液，按照1∶10的比例接種于DED表面，采用液下培養(yǎng)和空氣一液面培養(yǎng)相結(jié)合的方式進(jìn)行培養(yǎng)，2周后取培養(yǎng)的組織工程皮膚分別做HE染色、角蛋白免疫組化染色及Masson-Fontana染色，并取正常人皮膚做Masson-Fontana染色作為陽性對照。
　　結(jié)果：1.KCs、M

3、Cs混合培養(yǎng)于培養(yǎng)皿5天后，于倒置顯微鏡下觀察到KCs呈鋪路石狀生長，其間散布MCs，MCs樹突延伸到KCs細(xì)胞間。2.兩種細(xì)胞混合接種于DED，15天后HE染色顯示在DED上有3～6層表皮細(xì)胞，并可見角質(zhì)層，角蛋白免疫組化染色陽性，Masson-Font ana染色顯示基底層見黑素著色。
　　結(jié)論：MCs、KCs混合接種于培養(yǎng)皿可構(gòu)建MCs和KCs接觸生長的單細(xì)胞層，將MCs、KCs接種于DED可構(gòu)建含有黑素成分的組織工程皮膚。

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