大鼠血糖調(diào)節(jié)相關(guān)基因的克隆和功能研究.pdf

1、糖尿病在臨床上通常分為兩大類,即Ⅰ型糖尿病(胰島素依賴性,IDDM)和Ⅱ型糖尿病(非胰島素依賴性,IDDM)后者占所有糖尿病病例90﹪以上.NIDDM的基因定位策略主要有候選基因法和全基因組掃描法.候選基因法是指選定糖尿病發(fā)病過(guò)程中與糖代謝及信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的基因?yàn)檠芯繉?duì)象,進(jìn)而研究它們是否與糖尿病發(fā)病過(guò)程相關(guān)聯(lián).候選基因法簡(jiǎn)便易行,是目前乃至今后研究NIDDM的主要方法之一.然而,到目前為止,應(yīng)用該方法發(fā)現(xiàn)的結(jié)果較少,推測(cè)NIDDM基因很

2、可能包括許多未發(fā)現(xiàn)的新基因.為此,必須選用適當(dāng)?shù)姆椒▉?lái)發(fā)現(xiàn)新基因.作者在研究糖尿病的發(fā)生機(jī)制和防治策略的過(guò)程中,提出了一條新思路,即從正常的血糖自動(dòng)調(diào)節(jié)的基因途徑入手,先分離、克隆與血糖自動(dòng)調(diào)解相關(guān)的基因,再研究該些相關(guān)基因在糖尿病狀況下有何改變,為確定糖尿病相關(guān)或易感基因以及尋找防治途徑提供依據(jù).通過(guò)頸外靜脈--右心房導(dǎo)管插管術(shù)建立了大鼠血糖自動(dòng)調(diào)節(jié)模型,該模型制作簡(jiǎn)便,重復(fù)性好,人為干擾因素少.隨后對(duì)該模型大鼠的骨骼肌進(jìn)行的mRNA

3、差異顯示分析.差異顯示是一種用來(lái)檢測(cè)哺乳細(xì)胞基因表達(dá)差異的方法.自從1992年發(fā)明該方法以來(lái),至今已有許多條件優(yōu)化和改進(jìn),逐漸發(fā)展成一個(gè)比較成熟的鑒定兩種狀態(tài)下的差異表達(dá)基因的方法.該些改進(jìn)包括:錨定引物的數(shù)量可以從12條減少到4條;應(yīng)用長(zhǎng)引物可在嚴(yán)格的條件下進(jìn)行PCR擴(kuò)增;兩步PCR法增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性.除了綜合以上改進(jìn)外,該文采用先通過(guò)狹縫雜交初步篩選上百條的差異條帶、再克隆測(cè)序、Northern Blot雜交最后確定差異表達(dá)基因