衛(wèi)氣生理節(jié)律及相應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)變化規(guī)律的研究.pdf

1、衛(wèi)氣理論是中醫(yī)基礎(chǔ)理論的重要組成部分。《黃帝內(nèi)經(jīng)》對衛(wèi)氣的功能及運(yùn)行特點(diǎn)已有較為詳盡的論述。衛(wèi)氣學(xué)說一直是中醫(yī)的重要研究課題，一般集中在衛(wèi)氣的來源、運(yùn)行、功能及其臨床應(yīng)用。近年來，隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，一些學(xué)者嘗試借助現(xiàn)代醫(yī)學(xué)手段對衛(wèi)氣學(xué)說進(jìn)行闡釋。由此提出了關(guān)于衛(wèi)氣實(shí)質(zhì)的一系列學(xué)說。主要包括:衛(wèi)氣的免疫學(xué)說，衛(wèi)氣的熱代謝學(xué)說等，雖然在很多方面未取得一致的結(jié)論，卻從某種程度上促進(jìn)了衛(wèi)氣學(xué)說這一理論體系的完善。但關(guān)于衛(wèi)氣的現(xiàn)代研究大多從

2、單一功能探求其相應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)，偏離了中醫(yī)的整體觀念和《黃帝內(nèi)經(jīng)》衛(wèi)氣理論的原意。而且，很少涉及到衛(wèi)氣的節(jié)律性研究。
　　 代謝組學(xué)(metabolomics/metabonomics)是繼基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)之后興起的系統(tǒng)生物學(xué)的一個(gè)新的分支，它是通過考察生物體系受刺激或擾動前后（如將某個(gè)特定的基因變異或環(huán)境變化后）代謝產(chǎn)物圖譜及其動態(tài)變化研究生物體系的代謝網(wǎng)絡(luò)的一種技術(shù)。代謝組學(xué)拋開體內(nèi)紛繁復(fù)雜的生化分子互相作用和網(wǎng)絡(luò)

3、式代謝過程變化，對代謝的終端產(chǎn)物進(jìn)行多元化綜合分析，從整體上展示生物體內(nèi)在的變化狀態(tài)，避免了以往采用單一指標(biāo)或少數(shù)幾個(gè)指標(biāo)研究某種病理和生理變化。這種在方法學(xué)上具有融整體、動態(tài)、綜合、分析于一體的特點(diǎn)，符合中醫(yī)治療疾病和中藥作用的整體性原則。
　　 本文借助代謝組學(xué)技術(shù)，依據(jù)《黃帝內(nèi)經(jīng)》對衛(wèi)氣的功能及節(jié)律性的描述，分別從衛(wèi)氣的日節(jié)律、月節(jié)律、年節(jié)律來探求衛(wèi)氣的物質(zhì)基礎(chǔ)和內(nèi)源性變化規(guī)律，并討論了衛(wèi)氣年節(jié)律對健康人群外周血白細(xì)胞介素

4、10和干擾素γ的影響以及玉屏風(fēng)散水煎劑對衛(wèi)氣虛大鼠的影響。
　　 本篇論文內(nèi)容主要包括理論和實(shí)驗(yàn)兩大部分:
　　 第一部分:衛(wèi)氣的理論探討
　　 目的:從文獻(xiàn)中發(fā)掘衛(wèi)氣的節(jié)律性變化規(guī)律及物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 方法:根據(jù)古今文獻(xiàn)記載，從衛(wèi)氣的來源、循行路線、功能、實(shí)質(zhì)以及新研究方法的角度，對衛(wèi)氣進(jìn)行了詳細(xì)論述。
　　 結(jié)論:目前衛(wèi)氣的現(xiàn)代研究僅著眼于單一功能探求衛(wèi)氣本質(zhì)的過程，而忽略了從衛(wèi)氣的年、月、日

5、的生理節(jié)律及懷慓疾滑利的運(yùn)行特點(diǎn)探究其物質(zhì)性的方法，因而難以詮釋衛(wèi)氣的實(shí)質(zhì)，對衛(wèi)氣的物質(zhì)基礎(chǔ)范圍還缺乏整體而全面的認(rèn)識和研究，代謝組學(xué)技術(shù)提供了這方面研究的可能性。
　　 第二部分:實(shí)驗(yàn)研究
　　 實(shí)驗(yàn)一:衛(wèi)氣虛模型大鼠的建立及衛(wèi)氣相關(guān)物質(zhì)基礎(chǔ)的研究
　　 目的:運(yùn)用代謝組學(xué)技術(shù)研究衛(wèi)氣虛證大鼠及中藥干預(yù)后的血清代謝組學(xué)特征，尋找衛(wèi)氣相關(guān)生物標(biāo)志物。
　　 方法:采用熱寒交替刺激法制作衛(wèi)氣虛證大鼠模型（1

6、0只），給予玉屏風(fēng)散水煎劑進(jìn)行干預(yù)（10只），并設(shè)健康對照組（10只）。對三組大鼠，測量血壓、計(jì)算胸腺指數(shù)，斷頭取血，測血常規(guī);用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，對血清進(jìn)行代謝物檢測。利用主成分分析方法對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:Tablel-1，F(xiàn)ig.1-1示:大鼠血壓在三組間未呈現(xiàn)明顯差別(p＞0.05);模型組的白細(xì)胞數(shù)明顯高于對照組和治療組(P＜0.05)、模型組的胸腺指數(shù)明顯低于對照組、治療組(P＜0.05)。膽堿、磷酰

7、膽堿、高絲氨酸、蛋氨酸、脫氧胞苷、葉酸可能是區(qū)分對照組與模型組差異的潛在生物標(biāo)志物。
　　 結(jié)論:運(yùn)用血清代謝組學(xué)方法可以發(fā)現(xiàn)衛(wèi)氣虛證大鼠存在代謝譜的改變，膽堿、磷酰膽堿、高絲氨酸、蛋氨酸、葉酸可能是其潛在的疾病標(biāo)志物。對衛(wèi)氣虛證大鼠應(yīng)用玉屏風(fēng)散水煎劑進(jìn)行干預(yù)，其代謝譜具有積極的變化。
　　 實(shí)驗(yàn)二:衛(wèi)氣日節(jié)律變化規(guī)律研究
　　 目的:通過代謝組學(xué)技術(shù)，尋找衛(wèi)氣日節(jié)律變化規(guī)律的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 方法:按照

8、隨機(jī)數(shù)字表法，將體重約180-200g的SD大鼠隨機(jī)分為日組(12:00)、夜組(24:00)每組10只。分別于12:00/24:00，測量血壓、計(jì)算胸腺指數(shù)，斷頭取血，測血常規(guī)，用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，對血清進(jìn)行代謝物檢測。利用主成分分析方法對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:大鼠血壓、白細(xì)胞數(shù)均呈現(xiàn)明顯的夜高晝低變化（P＜0.05），胸腺指數(shù)的變化沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。4-甲基鄰苯二酚;多巴胺;磷酰膽堿、蛋氨酸對日夜

9、兩組分類有明顯貢獻(xiàn)。
　　 結(jié)論:SD大鼠衛(wèi)氣存在晝夜節(jié)律變化，多巴胺、磷酰膽堿、蛋氨酸、4-甲基鄰苯二酚可能是參與或調(diào)節(jié)衛(wèi)氣晝夜節(jié)律變化的潛在生物標(biāo)志物。
　　 實(shí)驗(yàn)三:衛(wèi)氣月節(jié)律變化規(guī)律研究
　　 目的:通過代謝組學(xué)技術(shù)，尋找衛(wèi)氣月節(jié)律變化規(guī)律的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 方法:以春分日所在農(nóng)歷月，確定月初組（陽歷2012年2月22日）、月中組（陽歷2012年3月7日）、月末組（陽歷2012年3月20日）。按照

10、隨機(jī)數(shù)字表法，將體重約180-200g的SD大鼠，稱體重按升序排列，隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分入三組中（每組10只）。分別于2012年2月22日/2012年3月7日/2012年3月20日的12:00，測量血壓，計(jì)算胸腺指數(shù)，斷頭取血，測血常規(guī)，用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，對血清進(jìn)行代謝物檢測。利用主成分分析方法對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:大鼠血壓、白細(xì)胞數(shù)、胸腺指數(shù)均呈現(xiàn)明顯的月節(jié)律變化(P＜0.05)。大鼠血壓、白細(xì)胞數(shù)月中組明顯高

11、于月初組、月末組(P＜0.05)，月初組、月末組組間差異不明顯(P＞0.05)。胸腺指數(shù)在月末組明顯低于月初組、月中組。確定對三組分類有貢獻(xiàn)的差異離子為:磷酰膽堿、蛋氨酸、血清素、賴氨酸。
　　 結(jié)論:SD大鼠衛(wèi)氣存在月節(jié)律變化，磷酰膽堿、蛋氨酸、血清素、賴氨酸可能是參與或調(diào)節(jié)衛(wèi)氣月節(jié)律變化的潛在生物標(biāo)志物。衛(wèi)氣的月節(jié)律變化可能影響到了機(jī)體氨基酸代謝。
　　 實(shí)驗(yàn)四:衛(wèi)氣年節(jié)律變化規(guī)律研究
　　 目的:通過代謝組

12、學(xué)技術(shù)，尋找衛(wèi)氣年節(jié)律變化規(guī)律的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 方法:分別于春分日（2012年3月30日）、夏至日（2012年6月21日）、秋分日（2012年9月22日）、冬至日（2012年12月21日）的12:00左右，對春分、夏至、秋分、冬至四組大鼠（每組10只），測量血壓，計(jì)算胸腺指數(shù)，斷頭取血，測血常規(guī)，用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，對血清進(jìn)行代謝物檢測。利用主成分分析方法對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:大鼠血壓、白細(xì)胞數(shù)、胸腺指

13、數(shù)均表現(xiàn)出明顯的季節(jié)性波動。大鼠血壓在冬至組明顯高于夏至組(P＜0.05);白細(xì)胞數(shù)在冬至組最低，與春分、夏至組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)、胸腺指數(shù)在夏至組明顯高于其它組(P＜0.05)。確定對春分、夏至、秋分、冬至四組間分類有貢獻(xiàn)的差異離子有:蛋氨酸、磷酰膽堿、谷氨酰胺、低聚異麥芽糖、海藻糖。
　　 結(jié)論:SD大鼠衛(wèi)氣存在年節(jié)律變化，磷酰膽堿、蛋氨酸、谷氨酰胺、低聚麥芽糖、海藻糖可能是參與或調(diào)節(jié)衛(wèi)氣年節(jié)律變化的潛在生物標(biāo)志

14、物。衛(wèi)氣的季節(jié)性變化可能對機(jī)體糖代謝產(chǎn)生了影響。
　　 實(shí)驗(yàn)五:衛(wèi)氣的年節(jié)律對健康人外周血白介素10和干擾素γ的影響
　　 目的:觀察健康人群外周血清中人體免疫標(biāo)志物白細(xì)胞介素10和干擾素γ的年節(jié)律性變化規(guī)律。
　　 方法:分別在春分、夏至、秋分、冬至四個(gè)節(jié)氣，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測春分組、夏至組、秋分組、冬至組健康志愿者（每組20名，男女各10名）外周血清中干擾素γ和白細(xì)胞介素10水平。
　　 結(jié)果:血