TMX基因與先天性肥厚性幽門狹窄易感性的研究.pdf

1、第一部分中國漢族人群先天性肥厚性幽門狹窄臨床特征
　　 目的：探討中國漢族人群先天性肥厚性幽門狹窄(CHPS)的臨床發(fā)病特點，為診斷、治療,以及遺傳易感基因研究和流行病學(xué)調(diào)查提供依據(jù)。
　　 方法：對307例CHPS住院患兒的病歷資料進行回顧性總結(jié)和分析，觀察項目包括患兒性別、發(fā)病年齡、體重變化、入院時電解質(zhì)及動脈血氣情況、B超檢查結(jié)果及合并其他先天性疾病情況。將發(fā)病10天內(nèi)治療者列為早期組，而超過10天者列為晚期組，比

2、較這兩組動脈血氣、電解質(zhì)及日平均體重增加的差別。
　　 結(jié)果：307例患兒中男性262例，女性45例，發(fā)病年齡1～351天，去掉離散程度較大者6例，其余301例平均發(fā)病年齡23.8±13.0天?；純撼錾w重1.6～4.5kg，平均3.24±0.44kg；只有1對同卵雙胞胎同時患??；合并其它先天性疾病共62例（20.2％），前二位的是心血管和消化系統(tǒng)的先天性異常。幽門環(huán)肌B超厚度3～8mm，平均5.4±1.1mm。早期組日平均體重

3、增加明顯大于晚期組，而低鉀血癥、低氯血癥及高碳酸血癥發(fā)生率明顯低于晚期組（P<0.05）；血鈉與血pH值無顯著性差異。
　　 結(jié)論：中國漢族人群CHPS以男性為主，發(fā)病年齡為3～5周，幽門環(huán)肌厚度5.4±1.1mm，合并其它先天性疾病比例較高，但家庭聚集發(fā)病少見。對于在出生后3～5周內(nèi)出現(xiàn)持續(xù)性嘔吐患兒，應(yīng)高度警惕CHPS，并應(yīng)盡快診治，以減少低氯低鉀性堿中毒的發(fā)生，避免病情進一步惡化。
　　 第二部分 CHPS核心家系

4、的全基因組芯片掃描分析
　　 目的：從全基因組范圍內(nèi)探索CHPS發(fā)病相關(guān)基因。
　　 方法：對由19個患兒及父母組成的核心家系，采用Affymetrix公司的SNP 6.0基因芯片進行全基因組芯片掃描，并用golden helix 6.4軟件包的FBAT模塊進行分析，搜索與CHPS發(fā)病相關(guān)的基因及位點，對所發(fā)現(xiàn)的有顯著性意義的位點，進一步根據(jù)基因的功能及P值，選擇候選基因。
　　 結(jié)果：以p值達10-5為判定標(biāo)準

5、，總共發(fā)現(xiàn)105個SNP位點，通過初步篩選，發(fā)現(xiàn)位于硫氧還蛋白相關(guān)跨膜蛋白1基因（thioredoxin-related transmembrane protein 1，TMX）上的多態(tài)性位點rs7161242與中國漢族人群CHPS發(fā)病相關(guān)聯(lián)。
　　 結(jié)論：TMX基因的rs7161242位點與中國漢族人群CHPS發(fā)病相關(guān)聯(lián)。
　　 第三部分 TMX基因與先天性肥厚性幽門狹窄遺傳易感性的關(guān)聯(lián)
　　 研究目的:探索T

6、MX多態(tài)性位點rs7161242[c.492T>G]及rs7160810[c.648G>A]與CHPS發(fā)病的相關(guān)性。
　　 方法: 應(yīng)用PCR及測序的方法，對多態(tài)性位點rs7161242及rs7160810進行基因分型，對22個核心家系進行TDT分析，進一步對31例CHPS患兒與60名正常對照采用病例-對照研究，來探索這兩個SNP位點與CHPS發(fā)病的相關(guān)性，并利用在線軟件對這兩個SNP位點進行生物信息分析，研究其多態(tài)性與TMX基

7、因結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系，進一步利用免疫組化方法來研究TMX基因表達與CHPS發(fā)病的關(guān)系。
　　 結(jié)果:測序結(jié)果驗證了芯片掃描的準確性，未發(fā)現(xiàn)新的突變位點；患兒、父母及正常對照者組內(nèi)這兩個多態(tài)性位點的Hardy-Weinberg平衡檢驗均P>0.05，TDT檢驗提示多態(tài)性位點rs7161242的G等位基因及rs7160810的A等位基因的均與CHPS發(fā)病相關(guān)，其P值分別為2.0×10-4和5.699×10-5；連鎖不平衡分析結(jié)果提

8、示：這兩個位點的r2為0.757，D'值為0.893，成緊密連鎖。病例-對照研究提示rs7160810位點A等位基因純合子患病風(fēng)險明顯增加(OR=3.932，95％CI：1.545～10.006，=8.924，P=0.012)；rs7161242位點G等位基因純合子患病風(fēng)險明顯增加(OR=4.222，95％CI：1.655～10.772，=9.630，P=0.002)。在線分析發(fā)現(xiàn)多態(tài)位點rs7161242位于第6 外顯子剪接受點(ac

9、ceptor site) 區(qū)域內(nèi)，會導(dǎo)致熵值和自由能的改變。Rs7161242位點的TT基因型的最大熵低于GG基因型（-19.55VS-22.22），所轉(zhuǎn)錄的RNA的二級結(jié)構(gòu)的自由能也低于GG基因型；rs7160810位點GG基因型的最大熵也低于AA基因型，所轉(zhuǎn)錄的RNA的二級結(jié)構(gòu)的自由能也低于AA基因型，提示rs7161242位點的GG基因型及rs7160810位點的AA基因型相對不穩(wěn)定，且其轉(zhuǎn)錄的mRNA也相對不穩(wěn)定。免疫組化結(jié)果提

10、示TMX基因在幽門平滑肌細胞膜和細胞漿表達，未發(fā)現(xiàn)在細胞核中表達。采用Image-Pro Plus 6.0（IPP）圖像分析系統(tǒng)測量陽性細胞平均光密度值(IOD mean，MOD)，半定量分析發(fā)現(xiàn)TMX基因在CHPS患兒幽門部平滑肌的表達量明顯弱于正常對照者（0.117±0.033 VS 0.229±0.044,P<0.001）。
　　 結(jié)論:
　　 1、TMX基因的多態(tài)性位點rs7161242[c.492T>G]及rs

11、7160810[c.648G>A]與中國漢族人群CHPS發(fā)病密切相關(guān)。Rs7161242位點GG基因型及rs7160810位點AA基因型是CHPS患病的危險因素。
　　 2、TMX基因的兩個多態(tài)性位點rs7161242[c.492T>G]及rs7160810[c.648G>A]會影響RNA的二級結(jié)構(gòu)。
　　 3、TMX基因在平滑肌細胞膜及細胞漿中表達，未發(fā)現(xiàn)在細胞核中表達。
　　 4、TMX基因在CHPS患兒的幽