聯(lián)合應(yīng)用左旋多巴和阿倫磷酸鈉干預(yù)兔激素性股骨頭壞死的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 利用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，探討在人為造成動(dòng)物脈管炎狀況下應(yīng)用大劑量激素沖擊而導(dǎo)致股骨頭壞死的發(fā)病機(jī)制。并在激素應(yīng)用后人為給予干預(yù)因素：分別使用左旋多巴，阿倫磷酸鈉以及二者聯(lián)合用藥，通過觀察血清中BGP、TRACP-5b的變化，骨小梁、骨密度變化，并對(duì)骨壞死程度進(jìn)行對(duì)比分析，為干預(yù)激素性股骨頭壞死提供客觀的理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 健康成年中國(guó)大耳白兔50只，體重2.5±0.5kg，雌雄不限。隨機(jī)分為五組，

2、每組10只。A組（正常對(duì)照組）：正常標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，用于實(shí)驗(yàn)對(duì)照；B組（疾病模型組）：經(jīng)耳緣靜脈注射10ug/Kg的脂多糖(LPS)，24小時(shí)后于臀肌注射20mg/Kg甲基強(qiáng)的松龍琥珀酸鈉(MPS)，共3次，每次間隔24小時(shí)，未予任何藥物干預(yù)；C組（左旋多巴組）：同B組建立模型，注射完成后當(dāng)日開始口服左旋多巴片，劑量0.4g/Kg/天；D組（阿倫磷酸鈉組）：同B組建立模型，注射完成后當(dāng)日開始口服阿倫磷酸鈉片，劑量10mg/天；E組：（左旋

3、多巴與阿倫磷酸鈉聯(lián)合用藥組）：同B組建立模型，注射完成后當(dāng)日開始同時(shí)口服左旋多巴片0.4g/Kg/天及阿倫磷酸鈉片10mg/天。實(shí)驗(yàn)期間每組動(dòng)物均以標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，肌肉注射青霉素80萬u/只，2次/周，預(yù)防感染。制模后第6周、10周分別采取每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物兔耳緣靜脈血2ml離心，收集上方血清，ELISA試劑盒測(cè)定血清中BGP、TRACP-5b含量水平；分別行雙髖X線片及MRI檢查；采用空氣栓塞法處死每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物5只，取出雙側(cè)股骨頭標(biāo)本，觀察比

4、較標(biāo)本大體形態(tài)變化后，先行Micro-CT掃描，分析計(jì)算出骨密度及骨小梁結(jié)構(gòu)參數(shù)；然后用10％福爾馬林液體浸泡固定后，經(jīng)脫鈣、包埋、切片后，HE染色，光鏡觀察骨小梁、骨細(xì)胞、及脂肪細(xì)胞等結(jié)構(gòu)變化。所得數(shù)據(jù)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，比較結(jié)果的差異性。
　　 結(jié)果：
　　 1．血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)：
　　 (1)反映骨形成的指標(biāo)骨鈣素(BGP)-

5、①組內(nèi)比較：A組在第6、10周比較均無顯著性差異(P＞0.05)。B、D組在第10周較第6周有所升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；C、E組第10周較第6周顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。②組間比較：第6、10周時(shí)B、D組較A組有所升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；C、E組較A組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；C、E組較B、D組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；B、D組之間相比無顯著性差異

6、(P＞0.05)，C、E組之間相比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 (2)反應(yīng)骨吸收的指標(biāo)抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP-5b)—①組內(nèi)比較：A組在第6、10周比較均無顯著性差異(P＞0.05)。B、C組在第10周較第6周顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；D、E組第10周較第6周降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。②組間比較：第6、10周時(shí)B、C組A組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；D、E組較A

7、組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；D、E組較B、C組顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；B、C組之間相比差異不大，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，D、E組之間相比較無顯著性差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2.影像學(xué)檢查：影像學(xué)(X線片、MRI及Micro-CT)顯示：B組10兔子中有8只12髖發(fā)生股骨頭壞死，C組中有2只3髖，D組中有1只2髖在用藥期間發(fā)生了股骨頭壞死，A、E組中影像學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)股骨頭壞

8、死表現(xiàn)。第10周時(shí)各組之間股骨頭骨密度相比較：B組較A組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；C、D組較A組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；E組較A組骨密度有所降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。C、D、E均較B組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；E組較C、D升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。C、D組之間相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。B組骨小梁結(jié)構(gòu)逐漸變細(xì)，數(shù)目減少，間隙增寬，骨小梁連續(xù)性破壞

9、較重，斷裂較多。C、D組骨小梁結(jié)構(gòu)較B組逐漸變粗，數(shù)目有不同程度增多，間隙變窄，連續(xù)性較好。E組骨小梁致密粗大，數(shù)目多，小梁間隙小，連接性好，與A組骨小梁三維結(jié)構(gòu)無顯著差別。
　　 3.組織病理學(xué)觀察：A組：骨小梁結(jié)構(gòu)整齊，粗大致密，排列規(guī)則，骨小梁中骨細(xì)胞多且清晰，呈橢圓形，位于骨陷窩內(nèi)，核較大，位于中央，偶可見空骨陷窩，骨小梁周圍有較多成骨細(xì)胞。骨小梁之間充滿骨髓造血細(xì)胞和散在的脂肪細(xì)胞。B組：骨小梁排列散亂，稀疏、大部分萎

10、縮、斷裂，骨小梁內(nèi)正常骨細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞核固縮，偏位于一側(cè)，空骨陷窩顯著增多，骨小梁周圍成骨細(xì)胞少見。骨小粱之間大量脂肪組織堆積，脂肪細(xì)胞體積變大，部分脂肪細(xì)胞互相融合。C組：骨小梁結(jié)構(gòu)尚規(guī)則，稍顯稀疏，少量斷裂，小梁內(nèi)骨細(xì)胞數(shù)目較多，細(xì)胞核較大，位于細(xì)胞中央，可見少部分空骨陷窩。髓腔內(nèi)生血細(xì)胞和成骨細(xì)胞較多，脂肪細(xì)胞基本正常存在少量的脂肪融合現(xiàn)象。D組：骨小梁排列規(guī)則，致密成網(wǎng)狀，未見明顯斷裂現(xiàn)象，小梁內(nèi)骨細(xì)胞數(shù)目較多，細(xì)胞核多偏于

11、細(xì)胞一側(cè)，可見部分空骨陷窩。髓腔內(nèi)生血細(xì)胞和成骨細(xì)胞較少，脂肪細(xì)胞大致正常，存在少量的脂肪融合現(xiàn)象。E組：骨小梁粗大致密，排列規(guī)則，骨小梁中骨細(xì)胞數(shù)目多，形態(tài)正常，大多數(shù)位于骨陷窩內(nèi)，細(xì)胞核多位于中央，空骨陷窩較少，骨小梁周圍有較多成骨細(xì)胞，骨髓造血細(xì)胞多，脂肪細(xì)胞大致正常，未見融合現(xiàn)象。
　　 結(jié)論：
　　 (1)在應(yīng)用內(nèi)毒素造成動(dòng)物脈管炎狀況下，短期內(nèi)應(yīng)用大劑量激素沖擊，可導(dǎo)致動(dòng)物激素性股骨頭壞死。
　　 (

12、2)Micro-CT作為一種新的檢測(cè)手段，能夠在不損傷樣本的條件下快速獲取股骨頭樣本斷層圖像，并對(duì)骨密度和骨小梁的空間結(jié)構(gòu)體系進(jìn)行分析計(jì)算，具有檢測(cè)快、分辨率高、精確度高、可進(jìn)行三維重建分析的優(yōu)點(diǎn)。
　　 (3)聯(lián)合應(yīng)用左旋多巴與阿倫磷酸鈉能夠在減少壞死骨吸收抗骨質(zhì)疏松的同時(shí)促進(jìn)新骨形成，加速骨修復(fù)，提高骨密度，改善骨小梁微觀結(jié)構(gòu)，有效地減緩或抑制股骨頭壞死的發(fā)生、發(fā)展，從而對(duì)實(shí)驗(yàn)性激素性股骨頭壞死起到較兩種藥物單獨(dú)應(yīng)用更好的治