2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、D-核糖是遺傳物質(zhì)核酸的組成成分,也是若干輔酶和維生素的組成部分,具有重要的生理作用。近年來利用D-核糖生產(chǎn)抗癌和抗病毒藥物已顯示出了強大的生命力。目前,最主要的生產(chǎn)方法是微生物發(fā)酵法。查考了國內(nèi)外D-核糖發(fā)酵的研究現(xiàn)狀及進展后,本論文以Bacillus Subtilis HGD107和Bacillus Subtilis104為出發(fā)菌,分別采用理化誘變(UV、DES)和基因工程的方法育種,最后獲得了一株轉(zhuǎn)酮酶缺陷型基因工程菌B.S pT

2、n15-1。用地衣酚顯色法確定了測定D-核糖產(chǎn)量的公式,并對工程菌進行發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化和發(fā)酵條件優(yōu)化,摸索出了最佳搖瓶發(fā)酵條件。 1.以Bacillus Subtilis HGD107為出發(fā)菌,采用UV和DES誘變,確定了紫外線、硫酸二乙酯的最佳誘變劑量:紫外燈20w距離30cm處照射30s。硫酸二乙酯濃度為1%(v/v),30min。選育出D-核糖產(chǎn)量較高的誘變株UD-30<'#>,D-核糖產(chǎn)量從4.67g/L提高到為24.03

3、g/L。 2.以Bacillus Subtilis 104為出發(fā)菌,采用同源重組法高效構(gòu)建枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)酮酶(tkt)缺失突變菌株。以大腸桿菌質(zhì)粒pBlUSKM為框架,構(gòu)建出基于枯草桿菌(B.S104)tkt基因位點的整合載體pb-Trs-n。將此載體重組到B.S104中,從新霉素抗性平板上挑取轉(zhuǎn)化子。整合載體pb-Trs-n的測序結(jié)果與Kunst.F報道的tkt基因高度同源(98.9%)。同源重組后,B.S104染色體上的tk

4、t基因(2004bp)部分與載體pb-Trs-n的neo基因(1197bp)發(fā)生了同源交換,確定了該轉(zhuǎn)化子為枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)酮酶缺失突變株(tkt,neo<'r>)。重組菌B.S pTn15-1D-核糖產(chǎn)量從4.81g/L提高到31.75g/L??疾炝嘶蚬こ叹膫鞔€(wěn)定性,該菌傳代5代后D-核糖的產(chǎn)量沒有明顯下降,表明該菌株較為穩(wěn)定。 3.對基因工程菌B.S pTn15-1進行了培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化。培養(yǎng)基優(yōu)化采用了單因子組合法

5、和正交試驗法,得出最適培養(yǎng)基配方為(%,w/v):葡萄糖15(補料),玉米漿2.5,(NH<,4>)<,2>SO<,4> 1.1,MnSO<,4> 0.005,KH<,2>PO<,4> 0.3,CaCO<,3> 1.0(分消)。通過試驗得出最適發(fā)酵條件為:初始pH 7.0,發(fā)酵溫度37℃;搖床轉(zhuǎn)速180r/min,接種量10%,裝液量300mL三角瓶裝30mL未接種發(fā)酵液,發(fā)酵液中添加5μg/mL的新霉素,采用24h和48h分批補糖發(fā)酵

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