Claudin-4在前列腺癌中的表達(dá)及其生物學(xué)功能初步研究.pdf

1、目的：探討Claudin-4蛋白在前列腺增生(Benign prostatic hyperplasia，BPH)、前列腺高級別內(nèi)瘤變(High grade prostate epithelial neoplasia，HGPIN)及前列腺癌(Prostate cancer，PCa)組織中的表達(dá)狀況及其與前列腺癌臨床分期、Gleason評分之間的關(guān)系。結(jié)合患者臨床前列腺特異性抗原(Prostate specific antigen，PSA)

2、隨診病歷資料對Claudin-4蛋白表達(dá)陽性及陰性的患者PSA進(jìn)行對比分析，觀察Claudin-4表達(dá)與前列腺癌患者PSA之間的關(guān)系；進(jìn)一步對激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞系PC-3中Claudin-4基因的表達(dá)狀況及靶向干擾Claudin-4基因后對前列腺癌PC-3細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力的影響。通過以上研究為前列腺癌的診斷、監(jiān)測以及治療后隨診判斷提供新的可供參考的標(biāo)志物。
　　方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測Claudin-4在4

3、2例前列腺增生組織、37例前列腺高級別內(nèi)瘤變和68例前列腺癌組織中的表達(dá)，并與Gleason評分、臨床分期之間的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；結(jié)合免疫組化研究結(jié)果以及患者PSA臨床隨診資料進(jìn)行Claudin-4表達(dá)狀況與PSA的隨診結(jié)果，對它們之間的關(guān)系進(jìn)行Kaplan-Meier生存分析；利用細(xì)胞培養(yǎng)PC-3細(xì)胞后，對細(xì)胞中Claudin-4基因應(yīng)用RT-PCR、Western blot檢測PC-3細(xì)胞中Claudin-4基因及蛋白的表達(dá)狀況；

4、進(jìn)一步進(jìn)行靶向干擾Claudin-4基因的(Claudin-4-siRNA)質(zhì)粒的構(gòu)建，構(gòu)建成功后轉(zhuǎn)染PC-3細(xì)胞，并應(yīng)用熒光定量PCR和Western blot技術(shù)檢測干擾效果，對干擾后的前列腺癌PC-3進(jìn)行MTT、Transwell及流式細(xì)胞儀檢測，并將實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：(1)Claudin-4蛋白在前列腺增生組織中僅少量表達(dá)，前列腺高級別內(nèi)瘤變中中等量表達(dá)、前列腺癌組織中呈現(xiàn)明顯高表達(dá)，在前列腺增生、前列腺

5、高級別內(nèi)瘤變和前列腺癌組織中Claudin-4蛋白表達(dá)的陽性率分別為14.29％(6/42)、35.14％(13/37)、61.76%(42/68)，它們之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Claudin-4蛋白表達(dá)在前列腺癌Gleason評分<7分陽性率為40.74％(11/27)，=7分為52.63%(10/19)，>7分為86.36%(19/22)，三組間比較差異有顯著性(P<0.05)；而在<7分與=7分之間比較無差異；臨床

6、TNM分期中，在Ⅰ和Ⅱ期與Ⅲ期和Ⅳ期Claudin-4蛋白表達(dá)率分別為48.72％和79.31％，它們之間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在前列腺癌組織中，Claudin-4表達(dá)與腫瘤臨床分期、Gleason評分密切相關(guān)；(2)對68例前列腺癌患者平均36個月隨訪PSA情況與Claudin-4蛋白表達(dá)的資料進(jìn)行總結(jié)，發(fā)現(xiàn)PSA有復(fù)發(fā)與無復(fù)發(fā)比率分別是45.45％(10/22)和78.26％(36/46)，進(jìn)行Kaplan-Meier生

7、存分析后，發(fā)現(xiàn)它們之間比較差異有顯著性(P<0.05)。(3)PC-3細(xì)胞培養(yǎng)后，利用RT-PCR和Western blot檢測細(xì)胞中Claudin-4基因和蛋白的表達(dá)明顯增高，穩(wěn)定構(gòu)建靶向干擾Claudin-4質(zhì)粒，利用Claudin-4-siRNA轉(zhuǎn)染PC-3細(xì)胞后與正常細(xì)胞組和空質(zhì)粒對照組相比，Claudin-4-siRNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力減低，細(xì)胞周期阻滯，它們之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：前列腺癌中C

8、laudin-4蛋白表達(dá)與前列腺癌的Gleason分級、臨床分期以及PSA復(fù)發(fā)密切相關(guān)，提示Claudin-4基因在前列腺癌發(fā)生和進(jìn)展中有重要作用，可能是前列腺癌的預(yù)后參考指標(biāo)。這些結(jié)果表明Claudin-4表達(dá)增加是前列腺癌發(fā)生進(jìn)展和患者PSA復(fù)發(fā)的一個危險(xiǎn)因素，可能是前列腺癌發(fā)生進(jìn)展和患者預(yù)后不良的一個靶標(biāo)。靶向RNA干擾Claudin-4基因能夠特異性地抑制Claudin-4在前列腺癌PC-3細(xì)胞中的表達(dá)，使PC-3細(xì)胞增殖、遷移