載基因微球的制備及其在促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖方面的初步應(yīng)用.pdf

1、本文制備了可降解載基因微球(Microparticles, MPs)，利用MPs/pEGFP-ZNF580復(fù)合物轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs），達(dá)到了促進(jìn) HUVECs增殖和遷移目的。針對高分子量聚乙烯亞胺(Polyethyleneimine，PEI)對細(xì)胞毒性高的問題，本文利用低分子量PEI制備了可降解型基因載體，并進(jìn)行了評價(jià)。
　　1.為了克服高分子量 PEI作為基因載體引起的細(xì)胞毒性問題，以聚乙二醇單甲醚(mPEG)、

2、3(S)-甲基-嗎啉-2,5-二酮(MMD)、乙交酯(GA)和低分子量PEI為原料，制備了甲氧基-聚乙二醇-嵌段-聚(3(S)-甲基-嗎啉-2,5-二酮-共聚-乙交酯)-接枝-聚乙烯亞胺三嵌段共聚物(mPEG-b-P(MMD-co-GA)-g-PEI)，經(jīng)自組裝形成“核-殼”結(jié)構(gòu)MPs。其中，MPs的疏水“核”由P(MMD-co-GA)組成，以它作為交聯(lián)點(diǎn)，連接著眾多的PEI和PEG鏈段，從而形成具有親水性且?guī)д姾傻摹皻ぁ薄?br>　

3、　MPs吸附并壓縮ZNF580基因，形成MPs/pEGFP-ZNF580復(fù)合物。與高分子量 PEI相比, MPs和MPs/pEGFP-ZNF580復(fù)合物的細(xì)胞毒性大大降低。MPs/pEGFP-ZNF580復(fù)合物的轉(zhuǎn)染效果與LipofectamineTM2000的轉(zhuǎn)染效果相似，經(jīng)轉(zhuǎn)染60小時(shí)后，HUVECs的增殖和遷移得到提高。本文提供了一種制備低毒性非病毒基因載體有效方法。
　　2.為了達(dá)到pEGFP-ZNF580從MPs/pEG

4、FP-ZNF580復(fù)合物中持續(xù)釋放的目的，合成了具有不同降解速率的三嵌段共聚物，進(jìn)而制備了具備不同降解速率疏水核心的MPs。首先，合成了甲氧基-聚乙二醇-嵌段-聚(3(S)-甲基-嗎啉-2,5-二酮)-接枝-聚乙烯亞胺(mPEG-b-PMMD-g-PEI)、甲氧基-聚乙二醇-嵌段-聚(3(S)-甲基-嗎啉-2,5-二酮-共聚-丙交酯)-接枝-聚乙烯亞胺(mPEG-b-P(MMD-co-LA)-g-PEI)和甲氧基-聚乙二醇-嵌段-聚(3

5、(S)-甲基-嗎啉-2,5-二酮-共聚-丙交酯-共聚-乙交酯)-接枝-聚乙烯亞胺(mPEG-b-P(MMD-co-LA-co-GA)-g-PEI)三嵌段共聚物。之后，經(jīng)自組裝形成了MPs。
　　pEGFP-ZNF580能夠通過該復(fù)合物轉(zhuǎn)染進(jìn)入 HUVECs，western blot分析表明ZNF580關(guān)鍵蛋白表達(dá)水平升高至35.74％-46.11%，pEGFP-ZNF580能夠持續(xù)釋放25天。這種MPs/pEGFP-ZNF580復(fù)

6、合物在實(shí)現(xiàn)組織工程支架和人工血管的快速內(nèi)皮化方面，具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
　　3.為了實(shí)現(xiàn) MPs對HUVECs的選擇性轉(zhuǎn)染，通過接枝 Arg-Glu-Asp-Val(REDV)多肽，制備了靶向性三嵌段共聚物，即REDV-接枝-聚乙烯亞胺-接枝-聚(丙交酯-共聚-乙交酯)-接枝-聚乙烯亞胺-接枝-REDV(REDV-g-PEI-g-P(LA-co-GA)-g-PEI-g-REDV)和REDV-接枝-聚乙烯亞胺-接枝-聚(丙交酯-共聚

7、-乙交酯-共聚-3(S)-甲基-嗎啉-2,5-二酮)-接枝-聚乙烯亞胺-接枝-REDV(REDV-g-PEI-g-P(LA-co-GA-co-MMD)-g-PEI-g-REDV)。以此為基材制備了HUVECs靶向性MPs。
　　在HUVECs和人臍動(dòng)脈平滑肌(HUASMCs)的共培養(yǎng)體系中，MPs/pEGFP-ZNF580復(fù)合物能夠特異性地選擇轉(zhuǎn)染 HUVECs，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，并抑制HUASMCs增殖。結(jié)果表明，這種MPs/Z