沙丁胺醇和萊克多巴胺在豬和山羊體內(nèi)的代謝及組織殘留預(yù)測(cè)研究.pdf

1、沙丁胺醇(Salbutamol，SAL)和萊克多巴胺(Ractopamine，RCT)都屬于β-腎上腺素受體激動(dòng)劑，具有廣泛的生理作用，可用做牛、羊、豬、家禽等畜禽的飼料添加劑，能夠顯著促進(jìn)食品動(dòng)物生長(zhǎng)，提高飼料轉(zhuǎn)化率，增加肌肉/脂肪比率從而提高瘦肉率。當(dāng)人體攝入過(guò)量的沙丁胺醇或萊克多巴胺會(huì)產(chǎn)生一定的毒性作用。中國(guó)、歐盟等許多國(guó)家都禁止沙丁胺醇和萊克多巴胺在動(dòng)物養(yǎng)殖中使用，而在實(shí)際生產(chǎn)中還存在違法使用。這對(duì)食品安全和人體健康造成了嚴(yán)重威

2、脅。目前對(duì)此類藥物的監(jiān)控大多采用宰殺動(dòng)物，檢測(cè)其可食性組織中的藥物殘留，造成了不必要的經(jīng)濟(jì)損失。因此，尋找一種簡(jiǎn)便又節(jié)約經(jīng)濟(jì)成本的監(jiān)控方法，成為當(dāng)務(wù)之急。本研究通過(guò)開(kāi)展沙丁胺醇和萊克多巴胺在豬和山羊的代謝及組織殘留消除規(guī)律，進(jìn)而研究體表組織與體內(nèi)主要可食性組織的相關(guān)性，在實(shí)際生產(chǎn)中通過(guò)檢測(cè)體表組織中藥物量而預(yù)測(cè)體內(nèi)可食性組織中藥物殘留量，達(dá)到“活體檢測(cè)”，為此類藥物的殘留檢測(cè)提出一種新型的監(jiān)控方法。
　　1、5種β-受體激動(dòng)劑定量

3、確證方法的建立
　　本研究建立了沙丁胺醇、齊帕特羅、克侖特羅、萊克多巴胺、苯乙醇胺A5種β-受體興奮劑在豬和山羊體表與體內(nèi)11種組織中的LC-MS/MS定量確證方法。組織樣品采用β-葡萄糖醛酸酶水解，堿化乙酸乙酯超聲提取，正己烷去脂，MCX固相萃取柱凈化，氨水-甲醇(1∶20)洗脫，氮?dú)獯蹈桑跏剂鲃?dòng)相復(fù)溶，HPLC-MS/MS檢測(cè)。結(jié)果顯示，沙丁胺醇、克倫特羅在豬和山羊肝臟、腎臟、肌肉、脂肪、肺臟、大腸、小腸、血漿、尿液、糞便中

4、的最低檢測(cè)限(LOD)為0.125μg/kg，最低定量限(LOQ)為0.25μg/kg;齊帕特羅、萊克多巴胺、苯乙醇胺A在10種組織中的LOD為0.25μg/kg，LOQ為0.5μg/kg。5種β-受體興奮劑在豬和山羊毛發(fā)中的平均回收率為61.0％-90.5％，變異系數(shù)≤11.3％;在豬和山羊其他組織中的平均回收率介于67.7％-89.7％，變異系數(shù)≤13.2％。
　　2、沙丁胺醇和萊克多巴胺在豬和山羊體內(nèi)的代謝研究
　　豬

5、和山羊各4頭，按1.2mg/kg bw單次灌胃給藥。分別在給藥后6h、12h、24h、……、14d收集尿液和糞便，并在前5個(gè)時(shí)間點(diǎn)采集血漿。尿液、糞便和血漿分別采用酶解和不酶解兩種方法處理，采用LC/MS-IT TOF鑒定代謝產(chǎn)物。沙丁胺醇在豬和山羊尿液中都檢測(cè)到三種化合物，分別為沙丁胺醇原形藥物(Salbutamol，SAL)、沙丁胺醇單葡萄糖醛酸結(jié)合物(Monoglucuronide of salbutamol，Glu-SAL)和甲

6、基結(jié)合物(Monomethyl of salbutamol，Me-SAL)，糞便中都只檢測(cè)到原形藥物。萊克多巴胺在豬和山羊尿液中都檢測(cè)到兩種化合物，萊克多巴胺原形藥物(Ractopamine，RCT)和萊克多巴胺單葡萄糖醛酸結(jié)合物(Mono-glucuronide of ractopamine，Glu-RCT)，糞便中都只檢測(cè)到原形藥物。
　　3、沙丁胺醇和萊克多巴胺在豬和山羊體內(nèi)的殘留預(yù)測(cè)研究
　　健康三元雜交豬和波爾山羊

7、各20頭，分5組，按20mg/kg混飼給藥，連續(xù)飼喂14天。停藥后6h、1d、3d、7d和14d分別宰殺一組動(dòng)物，取肝臟、腎臟、肌肉、脂肪、肺臟、大腸、小腸、血漿、尿液、糞便、毛發(fā)組織，按上述方法采用酶解和不酶解兩種方法對(duì)樣品進(jìn)行處理，LC-MS/MS檢測(cè)。根據(jù)動(dòng)物體表和可食性組織中藥物的殘留量，以毛發(fā)、血漿、尿液、糞便作為體表組織，研究體表組織與主要可食性組織肝臟、腎臟、肌肉、脂肪、肺臟中藥物殘留量的相關(guān)性。
　　沙丁胺醇在豬和

8、山羊體內(nèi)的研究結(jié)果顯示，豬尿液、血漿中沙丁胺醇濃度在酶解前后有顯著差異，其他組織無(wú)明顯差別。停藥后6h，豬肝臟比腎臟中藥物濃度高。停藥后7天，大多組織檢測(cè)不到藥物殘留。毛發(fā)中沙丁胺醇?xì)埩魰r(shí)間最長(zhǎng)，直到停藥后14天，藥物濃度還有57.26μg/kg。豬肝臟、腎臟、肌肉、肺臟、毛發(fā)中沙丁胺醇的消除半衰期分別為0.58d，0.63d，0.62d，0.45d，5.07d。山羊毛發(fā)和糞便中沙丁胺醇濃度在酶解前后無(wú)差別，其他組織有顯著差異。停藥后6

9、h，山羊腎臟比肝臟中藥物殘留量高。停藥后14天，只有毛發(fā)中能檢測(cè)到藥物殘留，為5.43μ g/kg。山羊肝臟、腎臟、肺臟、毛發(fā)中沙丁胺醇的消除半衰期分別為1.06d，0.54d，0.58d，7.6d。
　　沙丁胺醇在豬和山羊體表（或體液）與體內(nèi)組織的相關(guān)性分析結(jié)果，豬肝臟、腎臟、肌肉和肺臟中藥物殘留量與毛發(fā)或尿液，利用一元線性回歸擬合，相關(guān)系數(shù)都在0.9以上;與糞便的相關(guān)性以指數(shù)函數(shù)擬合最佳，相關(guān)系數(shù)都在0.95以上。山羊毛發(fā)與肝

10、臟，酶解后的肝臟、腎臟、肺臟中藥物殘留量與尿液（酶解后）或糞便都呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)大于0.9;山羊毛發(fā)與腎臟、脂肪、肺臟使用指數(shù)函數(shù)擬合的相關(guān)系數(shù)都大于0.94。由此，沙丁胺醇在豬體內(nèi)以毛發(fā)和尿液作為殘留監(jiān)控的體表組織最好，在山羊體內(nèi)以尿液和糞便作為殘留監(jiān)控的體表組織最佳。
　　萊克多巴胺在豬和山羊體內(nèi)的研究結(jié)果顯示，豬尿液、血漿、腎臟酶解前后萊克多巴胺的藥物濃度有顯著差異，其他組織無(wú)明顯差別。停藥后6h，豬腎臟比肝臟中藥物濃度

11、高。停藥后14天，毛發(fā)中萊克多巴胺藥物濃度仍有131.1μg/kg。豬肝臟、腎臟、肺臟、毛發(fā)中萊克多巴胺的消除半衰期分別為1.64d，1.57d，0.62d，2.17d，6.22d。山羊腎臟、肌肉、肺臟、尿液、血漿酶解前后萊克多巴胺的藥物濃度有明顯差別，其他組織差別不大。停藥后6h，山羊腎臟中藥物濃度較高，為125.7μg/kg，肌肉中藥物濃度最低，只有3.77μg/kg。停藥后14天，只有毛發(fā)中能檢測(cè)到藥物殘留，為8.88μg/kg。

12、山羊肝臟、腎臟、肌肉、脂肪、肺臟、毛發(fā)中萊克多巴胺的消除半衰期分別為0.7d，0.53d，0.91d，0.62d，1.16d，7.29d。
　　萊克多巴胺在豬和山羊體表（或體液）與體內(nèi)組織的相關(guān)性分析結(jié)果，豬毛發(fā)與肝臟、腎臟、肺臟的相關(guān)性以冪函數(shù)擬合最佳，相關(guān)系數(shù)都在0.9以上;尿液與肝臟、腎臟中藥物濃度，使用一元線性回歸擬合，相關(guān)系數(shù)都在0.9以上。山羊腎臟、脂肪和肺臟中藥物殘留量與毛發(fā)、尿液或糞便中藥物殘留量，酶解后的肝臟、腎

13、臟、肺臟中藥物殘留量與血漿中藥物殘留量都呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)在0.9左右。由此，萊克多巴胺在豬體內(nèi)以尿液作為殘留監(jiān)控的體表組織最好，在山羊體內(nèi)毛發(fā)、尿液和糞便都可作為殘留監(jiān)控的體表組織。
　　本文所建立的定量確證方法樣品前處理簡(jiǎn)單方便，靈敏度高。首次開(kāi)展了沙丁胺醇在豬和山羊體內(nèi)的代謝研究，以及沙丁胺醇和萊克多巴胺在豬和山羊體內(nèi)的組織殘留預(yù)測(cè)研究，所有組織都能找到與其呈線性關(guān)系的體表組織，其相關(guān)系數(shù)都在0.9左右，可以用于實(shí)際生產(chǎn)中