褪黑素通過(guò)調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中microRNA-155的表達(dá)發(fā)揮抑癌作用的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　檢測(cè)經(jīng)褪黑素處理后的膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中microRNA-155(miR-155)的表達(dá)情況,探討褪黑素對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲能力的影響,并探究其抑癌的相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　第一部分:1、選用人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株 U87、U373、U251共三株,分別用不同濃度(100μM、1μM、1nM)的褪黑素處理。運(yùn)用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)三株膠質(zhì)瘤細(xì)胞中miR-155的表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組的變化。明確褪黑素和miR

2、-155表達(dá)量的相關(guān)性,并確定引起miR-155表達(dá)量變化最大的褪黑素濃度。2、選定一株膠質(zhì)瘤細(xì)胞株,并選用引起miR-155表達(dá)量變化最大的濃度范圍的褪黑素處理細(xì)胞。通過(guò)CCK-8方法觀察膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖情況。3、通過(guò)流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及凋亡的變化。4、利用Transwell試驗(yàn)檢測(cè)褪黑素對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲的影響。
　　第二部分:1、選定一株膠質(zhì)瘤細(xì)胞,并選取引起miR-155表達(dá)量變化最大的濃度范圍的

3、褪黑素處理細(xì)胞。分別應(yīng)用Western blot和qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中MYB基因的mRNA及蛋白表達(dá)相對(duì)于對(duì)照組的變化,明確褪黑素與MYB基因的相關(guān)性。2、選同一株膠質(zhì)瘤細(xì)胞,將MYB基因干擾后用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中miR-155的表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組的變化,明確MYB和miR-155的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　第一部分:1、三株膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87、U373、U251經(jīng)過(guò)不同濃度(100μM、1μM、1nM)褪黑

4、素處理后,miR-155的表達(dá)相對(duì)于正常對(duì)照組均明顯下降(P<0.05),其中用1μM濃度褪黑素處理的細(xì)胞株中miR-155表達(dá)下降最明顯(P<0.01)。2、經(jīng)過(guò)1μM濃度褪黑素處理的U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖較對(duì)照組明顯下降。3、經(jīng)過(guò)1μM濃度褪黑素處理的U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡較對(duì)照組增高,而細(xì)胞周期沒(méi)有變化。4、經(jīng)過(guò)1μM濃度的褪黑素處理的U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和侵襲能力較對(duì)照組明顯下降。
　　第二部分:1、經(jīng)過(guò)1μM濃度褪黑素處理的

5、U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞中MYB基因的mRNA和蛋白表達(dá)量均明顯低于對(duì)照組。2、在U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞中干擾MYB基因后,miR-155的表達(dá)量下降。
　　結(jié)論：
　　本研究結(jié)果表明褪黑素通過(guò)下調(diào)MYB基因從而抑制miR-155表達(dá),1μM濃度褪黑素可以增加腫瘤細(xì)胞的凋亡使膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖降低,并且能抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力,進(jìn)而發(fā)揮抑癌作用。本實(shí)驗(yàn)闡明了褪黑素在腦膠質(zhì)瘤中抑癌作用的microRNA表觀調(diào)控機(jī)制,為揭示褪黑素的抗腦膠