高遷移率族蛋白1(HMGB1)在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)、亞細(xì)胞定位及與預(yù)后相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分 高遷移率族蛋白1(HMGB1)在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)、定位及與預(yù)后相關(guān)性研究
　　目的：高遷移率族蛋白1(highmobilitygroupbox1,HMGB1)作為核蛋白和細(xì)胞因子發(fā)揮著雙重作用。HMGB1在肝細(xì)胞癌中所起的作用尚不清楚,因此,我們分析了HMGB1在肝細(xì)胞癌組織、癌旁組織中的表達(dá)、亞細(xì)胞定位及與預(yù)后相關(guān)性,進(jìn)一步了解肝細(xì)胞癌的分子病理學(xué)機(jī)制。
　　方法：本研究運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法分析155例肝細(xì)胞

2、癌病例的癌組織、癌旁組織中HMGB1的表達(dá)及亞細(xì)胞位情況。酶聯(lián)免疫吸附方法(ELISA)檢測(cè)肝細(xì)胞癌病人血清HMGB1水平。同時(shí),分析HMGB1表達(dá)水平與臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性。
　　結(jié)果：免疫組織化學(xué)顯示所有正常肝組織中(18例)均存在HMGB1表達(dá),HMGB1蛋白主要定位于細(xì)胞核內(nèi),細(xì)胞質(zhì)中幾乎沒(méi)有。和正常肝組織的肝細(xì)胞HMGB1分布情況相比,76.6％(119/155)的癌旁組織中的肝細(xì)胞存在不同程度的HMGB1從細(xì)胞核

3、到細(xì)胞質(zhì)的轉(zhuǎn)位。所有的腫瘤組織均存在HMGB1蛋白表達(dá),HMGB1蛋白主要定位于細(xì)胞核內(nèi),腫瘤組織中核HMGB1蛋白水平明顯高于癌旁組織(p<0.001)。27.1%腫瘤組織中存在細(xì)胞質(zhì)HMGB1表達(dá)。同時(shí),ELISA檢測(cè)到肝細(xì)胞癌病人組血清中HMGB1水平明顯高于健康對(duì)照組(p<0.01)。相關(guān)性分析顯示腫瘤組織中細(xì)胞核HMGB1表達(dá)水平與Edmondson-Steiner等級(jí)(p<0.001)、TNM分期(p<0.001)、HBV-

4、DNA載量(p=0.033)、肝纖維化程度(p=0.002)及脈管侵犯(p=0.027)有明顯正相關(guān)性;癌旁組織肝細(xì)胞內(nèi)上調(diào)的細(xì)胞質(zhì)HMGB1蛋白水平與高HBV-DNA載量(p<0.001)及嚴(yán)重肝纖維化(p<0.01)明顯正相關(guān)。多因素分析結(jié)果顯示癌旁組織肝細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)HMGB1蛋白水平是影響無(wú)瘤生存率(p=0.006,HR=2.022,95%CI:1.222–3.343)和總體生存率(p=0.014,HR=2.102,95%CI:1.

5、162–3.806)的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因素。
　　結(jié)論：肝細(xì)胞癌組織中細(xì)胞核HMGB1蛋白表達(dá)上調(diào)和預(yù)后有明顯相關(guān),但不是獨(dú)立的預(yù)后因素;癌旁組織中肝細(xì)胞內(nèi)HMGB1的胞漿轉(zhuǎn)位是無(wú)瘤生存率和總體生存率的獨(dú)立預(yù)后因素。在行根治性肝切除后,進(jìn)一步治療策略可能從HMGB1在癌旁組織的表達(dá)、亞細(xì)胞分布特征中獲益。
　　第二部分 外源性的高遷移率族蛋白1(HMGB1)促進(jìn)肝癌細(xì)胞的遷移、侵襲
　　目的：體外研究外源性的HMGB1對(duì)肝

6、癌細(xì)胞惡性行為的作用并探討可能的機(jī)制。
　　方法：采用CCK-8方法檢測(cè)外源性的HMGB1對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響;運(yùn)用細(xì)胞遷移和侵襲試驗(yàn)評(píng)估外源性的HMGB1對(duì)肝癌細(xì)胞惡性行為的作用;同時(shí)使用細(xì)胞外HMGB1功能抑制劑甘草酸處理肝癌細(xì)胞進(jìn)一步確定HMGB1作用;運(yùn)用Western-blot方法檢測(cè)不用濃度HMGB1處理后肝癌細(xì)胞中ERK蛋白激活情況。
　　結(jié)果：CCK-8結(jié)果顯示外源性的HMGB1可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖,但并非

7、劑量依賴性;細(xì)胞遷移試驗(yàn)結(jié)果顯示HMGB1處理后的Hep3B細(xì)胞遷移數(shù)增加到2.01倍(±0.24)(p<0.01),處理后的Huh7細(xì)胞遷移數(shù)增加到1.62倍(±0.08)(p<0.01)。同樣地,細(xì)胞侵襲試驗(yàn)顯示外源性HMGB1處理后的Huh7細(xì)胞穿過(guò)基質(zhì)膠的數(shù)量增加到2.06倍(±0.18)(p<0.01)。同時(shí),甘草酸可以通過(guò)抑制外源性HMGB1減弱HMGB1引起的肝癌細(xì)胞遷移、侵襲能力增加。Westen-blot檢測(cè)結(jié)果證實(shí)H