肝細(xì)胞中高遷移率族蛋白1對(duì)病毒生活周期的影響.pdf

1、丙型肝炎病毒(HCV)為單股正鏈RNA病毒，感染了全世界約1.7億人，可導(dǎo)致慢性肝炎、肝硬化、肝癌等嚴(yán)重的肝臟疾病。聯(lián)合使用聚乙二醇干擾素和利巴韋林是經(jīng)典的丙肝治療方法，但約50％的1型HCV病人對(duì)此耐藥，研發(fā)丙肝的新療法迫在眉睫，而對(duì)HCV生活周期的闡述則為抗病毒研究提供治療的靶標(biāo)。高遷移率族蛋白1(HMGB1)是一種非組蛋白核蛋白，調(diào)節(jié)染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能。在病毒感染宿主細(xì)胞時(shí)，HMGB1既能抑制登革熱病毒和水泡性口炎病毒等病毒的復(fù)制

2、，又能促進(jìn)禽流感病毒的復(fù)制，本課題主要研究肝細(xì)胞中HMGB1對(duì)HCV生活周期的影響。
　　 我們運(yùn)用siRNA和shRNA等RNA干擾手段，對(duì)肝癌細(xì)胞系Huh7、Huh7.5以及HLCZ01中的HMGB1進(jìn)行基因沉默。在HCV感染Huh7.5和HLCZ01，以及NDV感染Huh7的實(shí)驗(yàn)中，沉默HMGB1導(dǎo)致細(xì)胞中的病毒含量降低，過表達(dá)HMGB1則導(dǎo)致HCV在HLCZ01細(xì)胞中的含量升高，同時(shí)IFNβ的表達(dá)水平與細(xì)胞中病毒含量呈正

3、相關(guān)性，這些結(jié)果預(yù)示著肝細(xì)胞中的HMGB1能夠促進(jìn)病毒復(fù)制，并且不是通過影響細(xì)胞的先天免疫反應(yīng)實(shí)現(xiàn)的。免疫熒光結(jié)果顯示，HCV的感染誘導(dǎo)了肝細(xì)胞中的HMGB1由胞核向胞質(zhì)的轉(zhuǎn)移。通過免疫共沉淀和RNA結(jié)合蛋白免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)，HMGB1不與HCV的core、NS2、NS5A等病毒蛋白結(jié)合，而與HCV的負(fù)鏈RNA結(jié)合。這些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，HCV感染肝細(xì)胞后，HMGB1從胞核轉(zhuǎn)移至胞質(zhì)，通過結(jié)合HCV負(fù)鏈RNA促進(jìn)HCV的復(fù)制。我們的研究對(duì)