TNF-alpha信號(hào)對(duì)K562-MV致瘤能力的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的：MV是真核細(xì)胞分泌的一種囊泡，近年來大量研究聚焦MV作為全新細(xì)胞信息交流載體的功能。我們的前期研究中發(fā)現(xiàn)，K562細(xì)胞來源的MV能夠在體外誘導(dǎo)正常造血干祖細(xì)胞（hematopoietic stem/progenitor cell，HSPC）惡性轉(zhuǎn)化成為可以在體外連續(xù)傳代和在體內(nèi)成瘤的白血病細(xì)胞。miRNA被認(rèn)為是MV發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)的關(guān)鍵分子之一，然而，鮮有研究報(bào)道MV中miRNA選擇性裝配的調(diào)控機(jī)制及其對(duì) MV生物學(xué)效應(yīng)的影響。

2、TNF-α是一種主要由巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子，并參與正常炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)，目前存在較多線索提示TNF-α可能能夠影響MV中miRNA的選擇性裝配進(jìn)而調(diào)控 MV的生物學(xué)功能。因此，本研究擬在前期研究基礎(chǔ)上，探討細(xì)胞中TNF-α表達(dá)對(duì)K562-MV誘導(dǎo)HSPC惡性轉(zhuǎn)化能力的影響，并研究其是否通過干預(yù)MV中miRNA選擇性裝配過程發(fā)揮效應(yīng)。
　　方法：體外培養(yǎng)K562細(xì)胞及敲除TNF-α的K562細(xì)胞K562TNFα-/

3、-，空敲K562細(xì)胞K562none-/-收集其MV，每日三次加入六孔板中培養(yǎng)的健康供者外周血?jiǎng)訂T物分離得到的單個(gè)核細(xì)胞中，比較不同MV誘導(dǎo)HSPC惡性轉(zhuǎn)化的效率。繼而通過實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)不同MV中BCR-ABL1 mRNA的表達(dá)水平，并以小RN A測(cè)序檢測(cè)不同MV中miRNA表達(dá)譜的差異。TargetScan分析差異表達(dá)的miRNA直接作用靶點(diǎn)，并通過生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)miRNA與轉(zhuǎn)錄因子（transcripti on factor

4、，TF）構(gòu)建的共調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及其功能富集，與造血干祖細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中重要信號(hào)通路進(jìn)行比對(duì)，探討TNF-α在K562-MV惡性轉(zhuǎn)化造血干祖細(xì)胞過程中的角色。
　　結(jié)果：我們研究發(fā)現(xiàn)，K562-MV，K562TNFα-/--MV和K562TNFα-/--MV均能誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，成為一種形態(tài)類似于單核細(xì)胞白血病的可在體外連續(xù)傳代的細(xì)胞。K562TNFα-/--MV相比K562-MV，K562TNFα-/--MV誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)

5、化的效率顯著低下，K562none-/--MV的誘導(dǎo)效率則無顯著變化。實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)各組MV中BCR-ABL1 mRNA表達(dá)水平并無明顯差異。小RNA測(cè)序顯示K562TNFα-/--MV中miR-28-3p，miR-150-5p，miR-451a，miR-1468-5p，let-7c-5p，miR-7641，miR-125b-5p，miR-10b-5p表達(dá)顯著上調(diào)。TargetScan預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)其中miR-125b-5p和miR-

6、10b-5p可作用于BCR/ABL1的3’UTR區(qū)，進(jìn)一步的生物信息學(xué)分析表明差異表達(dá)的miRNA與轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)成一個(gè)復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，其功能富集于造血干細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮重要作用的信號(hào)通路存在重疊。
　　結(jié)論：綜上分析，我們的研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α參與K562細(xì)胞分泌的MV誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的過程，其發(fā)揮效應(yīng)的主要機(jī)制并非通過在轉(zhuǎn)錄水平抑制BCR-ABL1 mRNA的表達(dá)，而是通過影響MV中miRNA的選擇性組裝，從表觀遺傳學(xué)