脂氧合酶在四種細(xì)胞系的表達(dá)及SV-HUC細(xì)胞中介導(dǎo)聯(lián)苯胺氧化應(yīng)激.pdf

1、[目的]：研究四種人正常細(xì)胞系(SV-HUC、HBE、HTR-8、HaCat)脂氧合酶同工酶蛋白表達(dá)及誘導(dǎo)表達(dá)情況，并比較5-LOX與CYP1B1/2E1蛋白表達(dá)水平;同時(shí)探討聯(lián)苯胺(BZD)對(duì)其致癌主要的靶細(xì)胞人膀胱上皮細(xì)胞（SV-HUC）的氧化應(yīng)激作用及5-LOX對(duì)其作用的影響;為LOX協(xié)同氧化外源性化學(xué)物及其損傷提供進(jìn)一步的線索。
　　[方法]：①蛋白印跡法測(cè)定5-LOX、12-LOX、15-LOX-2、CYP1B1、CYP

2、2E1蛋白表達(dá)水平;②以SV-HUC細(xì)胞為氧化應(yīng)激研究目標(biāo)細(xì)胞，不同濃度BZD(50、100、200μmol)染毒SV-HUC細(xì)胞24h，采用熒光分光光度計(jì)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ROS水平，分光光度計(jì)超氧歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和抗氧化劑(GSH)含量的變化，酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA)的含量;同時(shí)測(cè)定5-LOX特異性抑制劑AA861對(duì)上述氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響。
　　[結(jié)果]：①四種正常細(xì)胞中均有5-LOX、15-LOX-2的

3、表達(dá)，苯并(a)芘、BZD可誘導(dǎo)5-LOX表達(dá)增加;SV-HUC細(xì)胞中5-LOX蛋白表達(dá)水平與CYP2E1相差不大，高于CYP1B1;在正常HBE、HaCat、HTR-8細(xì)胞中，5-LOX蛋白表達(dá)水平低于CYP1B1;②BZD可誘導(dǎo)SV-HUC細(xì)胞內(nèi)ROS水平、CAT酶活力及MDA含量增加，BZD為100、200μmol/L時(shí)ROS和CAT活力顯著增加(p＜0.05)，200μmol/L BZD時(shí)MDA增加具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)

4、，細(xì)胞內(nèi)SOD酶活力隨著BZD濃度增加呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)(p＜0.05)，細(xì)胞內(nèi)GSH含量隨著毒物濃度升高而下降，BZD為200μmol/L時(shí)降低具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);預(yù)先使用不同濃度的抑制劑AA861的高濃度BZD組，AA861對(duì)上述氧化應(yīng)激指標(biāo)起到保護(hù)作用，以濃度為10μmol/L的AA861較好。
　　[結(jié)論]：5-LOX可能是上述四種人正常細(xì)胞系中協(xié)同氧化外源性化學(xué)物的主要的LOX同工酶;5-LOX抑制劑AA