白介素-11R介導分子靶向探針對肝癌動物模型多模態(tài)顯像.pdf

1、目的：通過構(gòu)建放射性核素及近紅外染料標記白細胞介素11類似物九環(huán)肽c(CGRRAGGSC)介導的小分子探針，獲得穩(wěn)定性好，標記率高，生物活性不改變的標記產(chǎn)品；通過對IL11受體（IL11R）高表達的腫瘤細胞及實體瘤的體內(nèi)外靶向性結(jié)合實驗、SPECT動態(tài)γ顯像及近紅外顯現(xiàn)，探討放射性小分子探針特異診斷IL11R表達陽性腫瘤靶向示蹤機理，研究荷人高轉(zhuǎn)移潛能肝細胞癌及其裸鼠骨皮下移植瘤模型顯像結(jié)果，初步探討其作用機制。
　　方法:(1)

2、化學合成DTPA-c(CGRRAGGSC)及其 HPLC和MS質(zhì)量分析報告；制備99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)及檢測其放射性化學純度、穩(wěn)定性和生物相容性。(2)Western blot檢測MHCC97H細胞和人正常肝細胞7702白介素11受體(IL-11R)表達情況；化學熒光FITC標記DTPA-c(CGRRAGGSC)實驗檢測探針與MHCC97H細胞的體外結(jié)合特性。(3)18只荷瘤裸鼠隨機分為6組（n=3），經(jīng)尾靜脈注

3、入0.74 MBq(0.1ml)分子探針99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)，不同時間測量其在荷瘤鼠體內(nèi)生物分布。（4）經(jīng)MHCC97H皮下移植瘤模型鼠尾靜脈尾靜脈注射99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)0.74 MBq(0.1ml)行SPECT顯像。（5）構(gòu)建近紅外染料Cy-7標記DTPA-c(CGRRAGGSC)探針，分別經(jīng)MHCC97H皮下移植瘤及骨移植瘤模型鼠尾靜脈注射行近紅外顯像。
　　結(jié)果：(1)合

4、成的DTPA-c(CGRRAGGSC)分子肽序為DTPA-KCGRRAGGSC-NH2，形成一對二硫鍵，分子量為1571.72，純度為96.8％；制備99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)即時測定其核素標記率為98.3％，即時測定其放化純度為(95.32±0.44)％，與人新鮮血清混合0、3h、6h和12h后，放化純度分別為(95.11±1.76)%、(95.05±0.37)%、(92.72±0.19)%、(90.16±0.53

5、)%，表明其與血清的生物相容性佳，體外穩(wěn)定性好。(2)經(jīng)Western blot檢測MHCC97H細胞表達的IL-11R量是7702細胞的21倍；化學熒光結(jié)合實驗表明99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)-FITC特異性結(jié)合在MHCC97H細胞的胞質(zhì)和胞膜上；DTPA-c(CGRRAGGSC)能競爭抑制99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)-FITC與MHCC97H細胞結(jié)合，MHCC97H細胞上IL-11R結(jié)合分子探針具

6、飽和性。(3)分子探針在荷瘤鼠體內(nèi)迅速、持續(xù)聚集在瘤體內(nèi)，4h達峰值（17.63±1.73％ID/g），其他臟器分布極少，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。(4)注射99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)后可見瘤體即刻濃聚；30min時可見膀胱及右側(cè)腎臟輕度顯影，隨著時間推移，在膀胱逐漸濃聚；4h后隨著小鼠排尿，膀胱淡影；6h時瘤體仍濃聚，全身淡影。即刻，30min和1、2、4、6h、8h T/NT比值分別為1.43±0.56、

7、2.49±0.69、5.77±0.27、7.31±0.65、10.49±0.10、6.45±0.26、4.75±1.21。（5）近紅外染料Cy-7標記核素探針后尾靜脈給藥,分別為注射探針后0.5h、1h、2h、4h、24h、48h及72h肝癌模型近紅外動態(tài)顯像，藥物靶向持續(xù)聚集在移植瘤內(nèi)，早期脊柱骨髓輕度顯影，4h后消退，其他重要臟器未見顯影。
　　結(jié)論：用自主合成的c(CGRRAGGSC)制備出性質(zhì)優(yōu)良的靶向性及穩(wěn)定性，99Tc