基于分子標(biāo)記手段輔助靈芝育種的研究.pdf

1、靈芝（Ganoderma lucidum）是中國(guó)傳統(tǒng)的藥用真菌。隨著靈芝大規(guī)模育種和栽培產(chǎn)業(yè)的擴(kuò)大化發(fā)展，對(duì)靈芝遺傳育種的研究提出了新的要求，通過(guò)現(xiàn)代分子標(biāo)記技術(shù)輔助靈芝遺傳育種對(duì)簡(jiǎn)化育種過(guò)程、減少育種盲目性具有重要意義。本研究通過(guò)建立羧甲基纖維素鈉篩選模型對(duì)127株靈芝菌株進(jìn)行篩選，以其中3株靈芝菌種為出發(fā)材料，通過(guò)制備原生質(zhì)體單核體、交配型測(cè)定、ISSR、RAPD、SRAP、親緣關(guān)系分析、雜交育種、主要生物學(xué)性狀關(guān)聯(lián)性分析等技術(shù)進(jìn)行

2、了靈芝遺傳育種的研究。主要研究結(jié)果如下:
　　1、從建立的羧甲基纖維素鈉篩選靈芝菌株分解纖維素能力大小的模型中挑選出G0119、G0130和G0154為出發(fā)材料，其中G0119和G0154相比于其他靈芝菌株，分解纖維素能力較強(qiáng)，而G0130分解能力弱。本論文建立的羧甲基纖維素鈉實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c研究結(jié)果對(duì)豐富靈芝的育種方法和擴(kuò)展靈芝種質(zhì)資源庫(kù)有積極的科學(xué)價(jià)值。
　　2、采用原生質(zhì)體單核化的方法成功制備得到109株單核體，其中G011

3、9、G0130和G0154的單核體數(shù)量分別為34株、36株和39株。并發(fā)現(xiàn)原生質(zhì)體單核化的概率與培養(yǎng)天數(shù)有關(guān)，即培養(yǎng)天數(shù)越長(zhǎng)，原生質(zhì)體單核化率越高，同時(shí)對(duì)得到的單核體菌株進(jìn)行了交配型測(cè)定，結(jié)果顯示不同交配型的單核體具有明顯的形態(tài)差異。
　　3、綜合利用三種分子標(biāo)記技術(shù)，即ISSR、RAPD以及SRAP對(duì)獲得的109株原生質(zhì)體單核體進(jìn)行了遺傳多樣性的測(cè)定，并采用UPGMA法構(gòu)建了菌株的遺傳關(guān)系聚類圖。聚類結(jié)果顯示，雖然出自同一個(gè)出發(fā)

4、菌株，但是單核體間存在差異。另外，比起單單利用某一種分子標(biāo)記手段，綜合采用三種標(biāo)記手段能更有效、更準(zhǔn)確地反映菌株間遺傳差異。
　　4、單核體雜交共計(jì)得到63株雜交子，雜交成功概率為0.80％，根據(jù)形成雜交子的親本不同，將其分為G、T和Z三個(gè)系列，經(jīng)拮抗實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，這63株雜交子均不同于出發(fā)的親本菌株，是新的菌株。
　　5、對(duì)雜交菌株綜合采用ISSR、RAPD以及SRAP這三種分子標(biāo)記研究它們的遺傳多樣性，通過(guò)聚類分析得到它們的

5、遺傳距離關(guān)系圖譜，發(fā)現(xiàn)雜交子菌株的遺傳多態(tài)性均較豐富，沒(méi)有出現(xiàn)兩個(gè)雜交子被完全聚類在一起的現(xiàn)象，且G、T和Z三個(gè)系列的雜交子均能夠被有序地分開(kāi)。
　　6、從遺傳系數(shù)（GS值）入手，分析了雜交子與其親本之間的GS值，并結(jié)合GS值的差異探討了菌株生物學(xué)性狀的差異，這些差異包括生長(zhǎng)速度、生物量、蛋白含量、多糖含量、纖維素酶活性等。結(jié)果顯示，雜交子遺傳差異的產(chǎn)生是由于形成其親本單核體的差異造成的，且菌株間的GS值越大，則它們的生長(zhǎng)速度、生

6、物量以及纖維素酶活性則越接近，反之，則相差越大。但對(duì)于多糖含量與蛋白含量這兩類生物學(xué)性狀而言，GS值卻沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的相關(guān)性。
　　7、雜交子的纖維素酶活性均不低于親本菌株，這表明通過(guò)分子標(biāo)記輔助育種篩選得到的雜交菌株具有不低于親本菌株的纖維素酶活性以及生物轉(zhuǎn)化率;同時(shí)，利用GS值可以考察生物量與生長(zhǎng)速度帶來(lái)的產(chǎn)量變化，通過(guò)篩選GS值相異的雜交菌株，可以快速判斷生物量與生長(zhǎng)速度的差異，從而減少親本選擇帶來(lái)的篩選冗余。通過(guò)GS值的判