家蠶NPV抗性遺傳分析及其雙抗病毒病分子標(biāo)記輔助育種.pdf

1、家蠶病毒病是養(yǎng)蠶業(yè)中主要病害,主要包含核型多角體病毒(Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus,簡稱BmNPV),質(zhì)型多角體病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus,簡稱BmCPV)和濃核病毒(Bombyx mori densovirus,簡稱BmDNV)三種,其中核型多角體病毒病對家蠶危害最為嚴(yán)重。家蠶核型多角體病毒是昆蟲病毒病中發(fā)現(xiàn)最早、研究得較詳

2、細(xì)的一類病毒病。目前的許多研究基本認(rèn)為家蠶對NPV的抗性主要是有一對常染色體的顯性主效基因和性染色體上的微效基因共同控制,但是還存在許多爭論。家蠶濃核病毒病在養(yǎng)蠶業(yè)上的危害時有發(fā)生。家蠶對濃核病毒的抵抗有顯隱性之分,其中濃核病毒中國鎮(zhèn)江株(BmDNV-Z)屬于Ⅱ型濃核病毒,家蠶對其抵抗主要是由一對隱性單基因控制。本研究證明了抗性品系NB對BmNPV的抵抗主要是由顯性單基因控制,在分子水平上分別獲得了一個與BmNPV和BmDNV-Z抗性緊

3、密連鎖的分子標(biāo)記R736和S851并將二者結(jié)合起來進(jìn)行雙抗病毒病分子標(biāo)記的輔助育種。獲得的結(jié)果如下:
　　 1.根據(jù)經(jīng)典遺傳學(xué)的實驗方法,通過組配抗性品系NB和感性品系雜交構(gòu)建BC1代和F2代群體,然后調(diào)查添毒后的分離比,經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析之后發(fā)現(xiàn)控制家蠶NB對病毒抵抗的基因,符合孟德爾顯性單基因遺傳規(guī)律。
　　 2.借助于RAPD技術(shù)進(jìn)行NPV抗性分子標(biāo)記的篩選,獲得了一個連鎖性緊密的分子標(biāo)記R736,該分子標(biāo)記在BC1代

4、和F2代擴(kuò)增結(jié)果的比例基本符合抗病性狀在BC1代和F2代1:1和3:1分離定律,這進(jìn)一步證明本實驗室的家蠶品種NB對核型多角體病毒的抵抗是由顯性單基因控制。同時為了能夠有效的鑒定和克隆該抗性基因,本實驗對該分子標(biāo)記進(jìn)行了染色體步移分析獲得了大約10kb的片段,為下一步該基因圖位克隆的完成提供基礎(chǔ)。
　　 3.根據(jù)日本學(xué)者公布的濃核病毒抗性基因nsd-2的基因組序列,結(jié)合比較基因組學(xué)的分析方法選擇合成一對引物進(jìn)行擴(kuò)增,獲得了一個與