冷凍前后臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對造血功能影響的實驗研究.pdf

1、目的：研究冷凍前后臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Human umbilical cord mesenchymal stromal cells hUC-MSCs）的生物學(xué)特性及其對造血干/祖細(xì)胞體外擴(kuò)增的影響。
　　方法：通過組織塊培養(yǎng)法從臍帶中分離獲得 hUC-MSCs，觀察其生長形態(tài)，取傳代培養(yǎng)至第3-6代，冷凍1、3月后復(fù)蘇。分別收集冷凍前后第三代細(xì)胞：
　　⑴生長動力學(xué)特點；
　?、屏魇綑z測免疫表型；
　?、嵌ㄏ蚍只T

2、導(dǎo)成骨、成脂肪細(xì)胞；
　?、妊芯科鋵υ煅?祖細(xì)胞體外擴(kuò)增的支持作用。
　　A組：單純骨髓單個核細(xì)胞（Bone marrow nuclear cells BMNCs）；
　　B組：BMNCs加人包皮成纖維細(xì)胞；
　　C組：BMNCs加骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；
　　D組： BMNCs加冷凍前；
　　E組：BMNCs冷凍加后hUC-MSCs。
　　分別于第0d，14d，28d，35d甲基纖維素法分析造血干

3、/祖細(xì)胞集落的增殖狀態(tài)及細(xì)胞因子SDF-1、SCF、TPO、IL-6,11的含量變化。
　　結(jié)果：
　?、爬鋬銮啊⒑驪3和P6收獲細(xì)胞的拒染率分別>93.8％和>92.4%；臍帶間質(zhì)原代培養(yǎng)收獲的細(xì)胞數(shù)不同，其生長生長動力學(xué)特點差別較大；
　?、迫四殠чg質(zhì)細(xì)胞具有間充質(zhì)細(xì)胞部分特征；不同的是CD34為24.2%；內(nèi)皮標(biāo)記CD31為13.3%；
　?、抢鋬銮昂缶上虺芍?、成骨細(xì)胞分化；
　?、炔煌瑫r間點造血干