間充質(zhì)干細(xì)胞對巨噬細(xì)胞活化及其功能影響的實驗研究.pdf

1、目的：探討在體外條件下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)對脂多糖(LPS)刺激后小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活化及其功能的影響。 方法：采用貼壁篩選法分離、純化BALB/c小鼠骨髓MSCs，用經(jīng)過高壓滅菌的4％巰基乙酸鈉溶液腹腔注射刺激，4天后收集小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，依材料和方法所述分組，建立MSCs與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)體系。用LPS(終濃度1ug/ml)刺激巨噬細(xì)胞18小時后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，檢測培養(yǎng)體系中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，轉(zhuǎn)化生長因子

2、-β(TGF-β)和一氧化氮(NO)等炎癥性細(xì)胞因子分泌量的變化，同時在培養(yǎng)體系中加入大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株(ATCC25922)，共孵育24小時后用緩沖液洗滌，盡量除去未被吞噬的細(xì)菌后固定，采用瑞氏染色檢查巨噬細(xì)胞吞噬功能的變化。 結(jié)果:用巰基乙酸鈉溶液腹腔注射刺激方法收集的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞為炎癥性巨噬細(xì)胞，其培養(yǎng)上清中可檢測到少量細(xì)胞因子，經(jīng)LPS進一步刺激活化后培養(yǎng)上清中TNF-α和NO的含量明顯上升，分別為(147.41±37

3、.13)pg/ml，(59.93±8.74)uM；而與MSCs共培養(yǎng)時，TNF-α顯著減少[(97.58±30.26)pg/ml，P=0.032]，NO降到(50.90±29.48)uM，P>0.05；當(dāng)培養(yǎng)體系中存在MSCs上清時，即MPMs+LPS+MSC上清組中，TNF-α和NO進一步減少為(58.28±3 1.54)pg/ml，(-3.36±2.31)uM，P<0.0005；然而，各組中TGF-β含量的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.