血管內(nèi)皮生長因子不同時間段經(jīng)鼻給予新生大鼠缺氧缺血性腦損傷模型后對神經(jīng)系統(tǒng)恢復效果的研究.pdf

1、目的：本研究建立7日齡SD大鼠缺氧缺血性腦損傷（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）模型，建模后將血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）分不同時間段經(jīng)鼻給予新生大鼠HIBD模型。通過觀察新生大鼠運動行為學改變、改良神經(jīng)功能缺失評分、腦組織形態(tài)學改變、腦組織病理改變以及腦細胞凋亡的變化，探討VEGF在新生大鼠HIBD后發(fā)揮神經(jīng)保護作用的最佳用藥時

2、間、方法，為臨床應(yīng)用VEGF治療新生兒缺氧缺血性腦病提供依據(jù)。
　　方法：(1)7日齡SD大鼠64只，隨機分為8組：A組為假手術(shù)組，行頸部切口后縫合不做HIBD處理，假手術(shù)后當天處死；B?H組均采用改良Rice法制備HIBD模型， B組HIBD模型建模后當天處死；C組建模后第6d處死；D組建模后第9d處死；E?H組建模后將10mg/L的VEGF分兩個時間段經(jīng)鼻給予新生大鼠，其中E組、F組建模后第1?3d給藥，每天1次，連續(xù)3d，E

3、組建模后第6d處死；F組建模后第9d處死；G組、H組在4?6d給藥，每天1次，連續(xù)3d，G組在建模后第6d處死；H組在建模后第9d處死。(2)各組新生大鼠處死前觀察新生大鼠運動行為學改變、改良神經(jīng)功能缺失評分，處死后觀察腦組織病理改變、腦組織形態(tài)學改變、腦細胞凋亡的變化。
　　結(jié)果：(1)新生大鼠運動行為學改變 A組新生大鼠運動、感覺、反射和平衡能力正常。B?H組HIBD模型建模后進行連續(xù)觀察2h：所有新生大鼠相繼出現(xiàn)間斷性的抖動

4、、皮膚青紫、軀體顫抖、尾部抽搐、翻身困難、尾部及臀部翹起并向左旋轉(zhuǎn)、走路不穩(wěn)等明顯異常的運動行為學變化。HIBD后的新生大鼠右側(cè)眼睛正常而左側(cè)眼睛張開遲緩，眼裂小，上瞼下垂。建模后第6d：C組、D組新生大鼠可以行走，但行動遲緩，不能翻身，平衡能力差易向左側(cè)傾倒；E組、F組可以行走，但不能順利翻身，平衡能力較差向左側(cè)偏斜；G組、H組可以行走，部分新生大鼠能較順利翻身，平衡能力較差向左側(cè)偏斜。建模后第9d：D組行走比較穩(wěn)，大部分能翻身，但平

5、衡能力較假手術(shù)組有明顯差異；F組行走穩(wěn)，可順利翻身，平衡能力較HIBD組好；H組9天后行走穩(wěn)，可順利翻身，平衡能力較好。(2)新生大鼠改良神經(jīng)功能缺失評分 A組新生大鼠評分0，無神經(jīng)功能缺失；B組14.63±1.41，嚴重神經(jīng)功能損傷。建模后第6d：C組9.63±1.51，中度損傷；E組6.75±1.39，中度損傷；G組4.00±0.76，輕度損傷。建模后第9d：D組7.63±1.92，中度損傷；F組5.25±1.49，輕度損傷；H組2

6、.75±0.89，輕度損傷。建模后4~6d給予VEGF治療的G、H組評分分別低于1~3d給藥的E、F組，均分別低于未給藥的C、D組，且p<0.05，差異有統(tǒng)計學意義。(3)腦組織形態(tài)學變化 A組新生大鼠腦組織大體外觀正常，兩側(cè)半球?qū)ΨQ，無水腫、液化及萎縮；B?H組HIBD模型建模后各時間點處死的新生大鼠腦組織左側(cè)大腦出現(xiàn)水腫、蒼白、液化等不同程度的異常改變。建模后第6d：C組新生大鼠腦組織左側(cè)大腦大片壞死液化區(qū)，經(jīng)VEGF治療的E組、G

7、組腦組織大體病變明顯輕于未治療各組，表現(xiàn)為中度的水腫，無大片液化壞死區(qū)。建模后第9d：D組新生大鼠腦組織左側(cè)大腦萎縮明顯，經(jīng)VEGF治療的F組、H組腦組織大體表現(xiàn)為輕中度的水腫。(4) HE染色 A組新生大鼠腦組織結(jié)構(gòu)層次清楚，細胞輪廓清晰，形態(tài)正常，細胞核居中。B~H組在建模后左側(cè)大腦皮質(zhì)區(qū)、海馬區(qū)、丘腦出現(xiàn)神經(jīng)細胞大片水腫、液化、壞死區(qū)。建模后第6d：C組新生大鼠腦組織切片左側(cè)大腦大片壞死液化區(qū)，細胞數(shù)目明顯減少；E組可見細胞壞死及

8、水腫，但沒有成大片壞死區(qū)域，細胞數(shù)目有所減少；G組可見明顯水腫細胞，細胞數(shù)目減少，可見膠質(zhì)細胞增生。建模后第9d：D組新生大鼠腦組織切片細胞數(shù)目減少更加明顯，有膠質(zhì)細胞增生；F細胞數(shù)目有所減少，細胞水腫減輕，膠質(zhì)細胞增生；H組可見細胞數(shù)目減少，細胞間隙增寬，膠質(zhì)細胞明顯增生。(5) TUNEL法檢測腦細胞凋亡 A組切片染色后偶可見核棕染的凋亡細胞，凋亡細胞數(shù)3.50±0.93個。B組左側(cè)缺血側(cè)大腦切片可見大量核棕染的凋亡細胞，凋亡細胞數(shù)

9、58.13±5.74個。建模后第6d：C組66.38±8.18個；E組為53.12±7.92個；G組為41.38±6.78個。建模后第9d：D組50.50±5.68個；F組為35.63±6.05個，H組為29.25±3.49個。建模后4~6d給予VEGF治療的G、H組凋亡細胞數(shù)分別低于1~3d給藥的E、F組，均分別低于未給藥的C、D組，且p<0.05，差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：(1)經(jīng)鼻將VEGF給予新生大鼠HIBD模型后可以