SIRT1-LXR-NF-κB可能是促使動(dòng)脈粥樣硬化斑塊消退的重要信號(hào)通路.pdf

1、目的：建立U937泡沫細(xì)胞模型，研究SIRT1與泡沫細(xì)胞移出動(dòng)脈粥樣硬化斑塊相關(guān)調(diào)控通路LXR-CCR7和促炎癥信號(hào)NF-κB的相關(guān)性。
　　方法：體外培養(yǎng)人單核細(xì)胞株U937細(xì)胞，通過軟脂酸鈉和氧化型低密度脂蛋白構(gòu)建泡沫細(xì)胞模型。實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組，轉(zhuǎn)染試劑組，siRNA干擾組，高脂組、高脂+SRT1720組、高脂+SRT1720+干擾組。油紅O對(duì)細(xì)胞進(jìn)行脂肪染色，檢測細(xì)胞內(nèi)脂肪積累情況。以160nMPMA誘導(dǎo) U937單核細(xì)胞

2、，24h后細(xì)胞呈貼壁生長以后，進(jìn)行 SIRT1 siRNA干擾操作，干擾48h后，進(jìn)行 Western blot檢驗(yàn)。然后在泡沫細(xì)胞模型中用 SIRT1激動(dòng)劑 SRT1720使SIRT1高表達(dá)，高表達(dá)后再用 RNA干擾抑制SIRT1的表達(dá)，用Western blot法觀察SIRT1、LXR及其下游靶分子CCR7和ABCA1的表達(dá)變化，以及炎癥因子NF-κB和其下游靶分子TNF-α、IL-6的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：觀察細(xì)胞內(nèi)脂肪積累

3、的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,高脂高膽固醇組誘導(dǎo)下的細(xì)胞內(nèi)脂肪積累顯著高于高糖對(duì)照組。Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明siRNA對(duì)SIRT1蛋白表達(dá)有顯著抑制作用，SIRT1蛋白表達(dá)顯著下降。在泡沫細(xì)胞模型中，SRT1720使SIRT1蛋白表達(dá)水平升高，LXR和其靶分子CCR7蛋白水平無顯著變化，而NF-κB以及其靶分子TNFα蛋白表達(dá)水平顯著下降。在加入SRT1720的基礎(chǔ)上再用RNA干擾抑制SIRT1的表達(dá)，結(jié)果表明RNA干擾使SIRT1的表

4、達(dá)水平顯著下降，LXR和其靶分子CCR7表達(dá)也隨之下降；與此同時(shí)，NF-κB及其下游靶基因TNF-α表達(dá)水平顯著升高。
　　結(jié)論：在高脂加氧化型低密度脂蛋白培養(yǎng)條件下,人單核細(xì)胞株內(nèi)積累了大量的脂肪。我們的實(shí)驗(yàn)表明了在泡沫細(xì)胞中SIRT1是LXR-CCR7以及NF-κB信號(hào)通路的上游，并且有可能通過上調(diào)LXR-CCR7信號(hào)通路，抑制NF-κB炎癥信號(hào)來參與調(diào)節(jié)泡沫細(xì)胞從動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中移出。為探究長壽基因SIRT1在動(dòng)脈粥樣硬化