p38信號通路對角膜緣干細胞和皮膚上皮干細胞體外培養(yǎng)過程中增殖與分化的影響.pdf

1、目的:探討p38信號通路對體外培養(yǎng)的角膜緣干細胞和皮膚上皮干細胞增殖及分化的影響。
　　 方法:小鼠角膜緣干細胞系TKE2用KSFM培養(yǎng)基培養(yǎng)，人的皮膚上皮干細胞以3T3作滋養(yǎng)層用SHEM培養(yǎng)基體外培養(yǎng)。人角膜緣和皮膚組織用OCT包埋并冰凍切片后進行免疫染色。通過慢病毒誘導的方法，活化或抑制TKE2細胞和人皮膚上皮干細胞中p38信號通路的活性，并通過免疫印跡分析、免疫熒光染色，結合結晶紫染色和MTT檢測等方法，檢測p38信號通路

2、的活性及干細胞標志物的表達水平的變化。
　　 結果:在正常人的皮膚及角膜組織中，p38信號通路在人皮膚和角膜緣上皮表層部位活性較強。干細胞標記物p63、增值性指標Ki67及增殖相關角蛋白K14、K16主要表達于皮膚及角膜緣上皮組織基底層，終末分化標志蛋白K10和K12分別表達于皮膚和角膜上皮的表層細胞中。Notch信號通路的下游基因Hesl，在皮膚和角膜上皮的基底層表達較強，表層細胞中表達減弱。抑制角膜緣和皮膚上皮干細胞中的p3

3、8信號通路，可顯著提高其克隆形成率和形成面積，且克隆細胞中p63、K14、K16表達量增加，同時Notch信號通路受體Notchl和下游基因Hesl表達量也有所增加。
　　 結論:p38信號通路可影響角膜緣干細胞和皮膚上皮干細胞的增殖能力，導致其分化加速。對p38信號通路的抑制，可以更好的維持角膜緣干細胞和皮膚上皮干細胞在體外培養(yǎng)時的增殖能力。同時，抑制p38信號通路的活性后，可以引起Notch信號通路的活性上調(diào)，并共同作用于上