不同溫度下大鼠睪丸支持細(xì)胞膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)生長因子的表達(dá).pdf

1、目的通過觀察不同溫度條件下體外大鼠睪丸支持細(xì)胞GDNF表達(dá)特點(diǎn)，探討高溫致不育的機(jī)制方法采用組合酶消化法和選擇性貼壁法分離雄性Wistar大鼠睪丸支持細(xì)胞（Sertoli cell，SC），將分離的SC分別置于不同溫度進(jìn)行體外培養(yǎng)，觀察其貼壁、形態(tài)學(xué)變化，F(xiàn)ASL免疫組化鑒定。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組(35℃)、實(shí)驗(yàn)組(36℃、37℃、38℃、39℃)。CCK-8法檢測(cè)SC增殖情況，HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)及結(jié)構(gòu)，RT-PCR、免疫熒光及Wester

2、n Blotting檢測(cè)細(xì)胞GDNF的表達(dá)。
　　結(jié)果本實(shí)驗(yàn)條件下，體外分離培養(yǎng)SC純度=(95.30±2.15)％(n=10)，CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，36℃時(shí)細(xì)胞增殖率最高(P＜0.01），＞36℃時(shí)，隨著溫度的提高，增殖率逐漸降低，39℃對(duì)細(xì)胞增殖具有明顯抑制作用(P＜0.01);免疫熒光結(jié)果顯示，GDNF表達(dá)于支持細(xì)胞胞質(zhì)，36℃時(shí)熒光最強(qiáng)，RT-PCR及Western Blotting法檢測(cè)結(jié)果顯示，高于36℃時(shí)，GDN