淫羊藿苷協(xié)同三氧化二砷對人肝細胞肝癌的抑制作用.pdf

1、[目的]
　　肝細胞肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是最常見的惡性腫瘤之一，嚴重影響著人類的健康，在我國每年肝癌的發(fā)病率約為20/10萬，其死亡率高居所有癌癥死亡率第二位。目前，最有效的治療手段為手術切除和肝移植，但療效欠佳，術后腫瘤的復發(fā)和肝內(nèi)及遠處轉(zhuǎn)移發(fā)生率較高。除此之外，化學藥物治療是肝臟惡性腫瘤一種重要的治療方法，一般來講可作為不能手術切除的腫瘤及肝癌術后的輔助治療、術后復發(fā)治療的重要的補充

2、治療手段。化療藥物殺傷腫瘤細胞主要是通過促進腫瘤細胞凋亡，從而起到治療腫瘤的目的。在化療過程中腫瘤細胞對化療藥物誘導的腫瘤細胞凋亡具有抵抗力，某些腫瘤甚至可在化療治療后出現(xiàn)耐藥，嚴重影響化學藥物治療效果。一方面化療藥物誘導腫瘤細胞凋亡，另一方面化療藥物激活腫瘤細胞內(nèi)的一系列生物信號，使得腫瘤細胞對化療藥物的抵抗能力增加。抑制和促進腫瘤細胞凋亡的各種因素之間的相互作用決定了細胞的凋亡。
　　肝細胞肝癌的腫瘤新生血管生成被認為與HCC

3、的侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學行為密切相關。血管內(nèi)皮細胞生長因子(vasculaur endothelial growth factor，VEGF)是腫瘤新生血管生成中最主要的刺激因子，與HCC的侵襲、轉(zhuǎn)移和腫瘤新生血管生成密切相關，VEGF被認為是HCC血管生成中最主要的刺激因子。Vasohibin-1是一個可以被VEGF誘導的血管生成負反饋抑制因子，因此研究vasohibin-1參與腫瘤新生血管生成異常疾病的發(fā)生、發(fā)展備受關注。
　　核

4、因子-κb(nuclear factor-κb，NF-κb)是一類廣泛存在的轉(zhuǎn)錄因子，與凋亡、免疫反應有著密切的聯(lián)系。近來研究發(fā)現(xiàn)能被多種化療藥物所激活，尤其是干擾核酸生成的抗腫瘤藥物，并且通過多種機制參與了腫瘤細胞耐藥的形成，與腫瘤的化療密切相關。除此之外，還研究發(fā)現(xiàn)NF-κb與胚胎發(fā)育中的細胞凋亡也有相關性。人們逐漸認識到腫瘤的發(fā)生，以及腫瘤細胞先天形成、后天獲得的對化療藥物的耐藥性與NF-κb所調(diào)節(jié)的細胞凋亡密切相關，即腫瘤細胞中

5、NF-κb可能與相關抑制因子表達缺失、結(jié)構(gòu)性激活等因素導致NF-κb過度激活。NF-κb的作用及其在實踐中的應用成為當前研究的熱點內(nèi)容之一。激活后的NF-kb在腫瘤細胞中主要發(fā)揮抑制腫瘤細胞凋亡的作用，并且抗調(diào)亡作用具有多樣性，在肝癌、淋巴瘤、胃癌等多種腫瘤中均已經(jīng)被證實。
　　淫羊藿苷(Icariin ICA)作為淫羊藿主要的提取物，是一種天然化合物，有抗腫瘤等多種藥理學功效。ICA作為一種常見中藥，近年來研究發(fā)現(xiàn)，ICA具有活

6、血化瘀、增強免疫、扶正培本且無明顯不良反應，而且對心血管、腦血管系統(tǒng)、骨代謝、免疫系統(tǒng)及抗腫瘤治療等方面具有廣泛的藥理作用，它能抑制腫瘤細胞生長、誘導腫瘤細胞凋亡。本課題旨在探討NF-κb和Vasohibin-1在肝細胞肝癌中的表達情況及其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用，他們之間是否存在相關性。通過實驗研究淫羊藿苷能否加強三氧化二砷在對肝細胞肝癌的治療中的抗腫瘤活性，為闡明肝癌的發(fā)病機理和提高肝癌的化療效果進行有益的探索。
　　[方

7、法]
　　1.Vasohibin-1蛋白、NF-κb蛋白在肝細胞肝癌組織中的表達:選取山東省省立醫(yī)院及濟寧市第一人民醫(yī)院病理科106例肝癌組織及相應癌旁組織，應用免疫組織化學方法檢測vasohibin-1、NF-κb的表達，分析vasohibin-1、NF-κb在HCC組織中的表達有無相關性。
　　2.通過MTT試驗及流式細胞儀分別檢測細胞增殖和細胞凋亡。通過熒光信號來分析ROS水平和線粒體膜電位的變化。蛋白免疫印跡檢測蛋白

8、質(zhì)的表達，酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測NF-κb活性。
　　[結(jié)果]
　　1.Vasohibin-1蛋白在肝癌組織中的表達:免疫組化檢測結(jié)果顯示vasohibin-1蛋白在106例肝癌組織中的高表達陽率為68.90％(73/106)，癌旁組織中高表達陽性率16.04％(17/106)，經(jīng)統(tǒng)計學分析，vasohibin-1在HCC中的高表達陽性率高于非腫瘤癌旁組織，二者間有顯著性差異(x2=60.55，P＜0.001)。
　　N

9、F-κb蛋白在肝癌組織中的表達:免疫組化檢測結(jié)果顯示NF-κb蛋白在106例肝癌組織中的高表達陽性率為71.70％(76/106)，癌旁組織中高表達陽性率23.58(25/106)。經(jīng)統(tǒng)計學分析，NF-κb在HCC中的高表達陽性率高于癌旁組織，二者間有顯著性差異(x2=49.19，P＜0.001)。
　　Vasohibin-1和NF-κB表達水平之間的相互關系:76例NF-κb高陽性表達的HCC組織中Vasohibin-1低陽性表

10、達19例，Vasohibin-1高陽性表達57例，30例NF-κb低表達陽性的HCC組織中Vasohibin-1高陽性表達16例，Vasohibin-1低陽性表達14例，經(jīng)統(tǒng)計學分析，NF-κB及Vasohibin-1在HCC中的表達無顯著性相關(x2=4.70，P＞0.05)。
　　2.淫羊藿苷在所有的肝細胞肝癌細胞組中對肝癌細胞的抑制增殖、誘導凋亡作用存在劑量依賴性。無論體內(nèi)實驗還是體外實驗，淫羊藿苷都能加強三氧化二砷的抗腫瘤

11、活性。淫羊藿苷抗腫瘤活性和它對三氧化二砷的加強作用與細胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生及NF-κb活性抑制相關。
　　[結(jié)論]
　　1.Vasohibin-1蛋白在肝癌組織中高表達，在癌旁組織中弱表達，vasohibin-1可作為臨床檢測的有重要參考價值的標志物，對判斷肝癌發(fā)生、發(fā)展及判斷預后有重要意義;NF-κb在肝癌組織中高表達，可能與其抑制腫瘤細胞凋亡，促進腫瘤細胞增殖有關，但是NF-κb與Vasohibin-1蛋白在肝細胞肝癌組織中