利用AFLP分子技術(shù)對(duì)我國(guó)三疣梭子蟹群體（Portunus trituberculatus）的遺傳多樣性的研究.pdf

1、三疣梭子蟹是我國(guó)重要經(jīng)濟(jì)蟹類之一，肉質(zhì)細(xì)嫩，脂膏肥滿，味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富。但是，由于過(guò)度捕撈，梭子蟹自然種群逐漸衰退。本研究分別以渤海地區(qū)三疣梭子蟹野生和養(yǎng)殖群體以及渤海、黃海、東海野生群體為研究對(duì)象，采用當(dāng)前最有效的分子標(biāo)記手段AFLP技術(shù)分析其遺傳多樣性及遺傳分化情況，從而了解三疣梭子蟹生存和種質(zhì)資源狀況，為避免資源衰竭，確保有足夠數(shù)量進(jìn)行繁殖以及可持續(xù)利用，良種選育等提供基礎(chǔ)性依據(jù)。 作者于2006-2007年用拖網(wǎng)分別從

2、渤海灣天津海域采集了野生三疣梭子蟹30只，從青島(黃海海區(qū))和浙江舟山市蓮花島(東海海區(qū))各采集了20只。樣本經(jīng)AFLP技術(shù)分析后，結(jié)果參考RAPD標(biāo)記數(shù)據(jù)分析方法，將AFLP標(biāo)記作為等位基因進(jìn)行多態(tài)性研究。實(shí)驗(yàn)選用了TFPGA1.3和PopGene1.31兩種軟件進(jìn)行結(jié)果分析。選擇電泳后選擇清晰的擴(kuò)增片段進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，在相同遷移位置按每一個(gè)體擴(kuò)增片段的有無(wú),出觀擴(kuò)增帶記錄為1,無(wú)擴(kuò)增帶記錄為2，個(gè)體每個(gè)擴(kuò)增片段的等位基因數(shù)默認(rèn)為2，輸

3、入TFPGA1.3軟件計(jì)算以下參數(shù)：多態(tài)位點(diǎn)數(shù)，多態(tài)位點(diǎn)百分率，雜合度，種群間遺傳近交系數(shù)Fst并根據(jù)遺傳距離繪制UPGMA聚類圖。將電泳圖譜中擴(kuò)增條帶的有無(wú)轉(zhuǎn)化為0，1原始數(shù)據(jù)矩陣采用PopGene1.31計(jì)算Shannon氏遺傳樣性信息指數(shù)，群體間遺傳分化度，遺傳距離等參數(shù)。主要結(jié)果和結(jié)論如下： 1.利用5對(duì)選擇性引物對(duì)我國(guó)渤海地區(qū)三疣梭子蟹野生群體和養(yǎng)殖群體各30個(gè)個(gè)體進(jìn)行了初步研究。五組引物共擴(kuò)增出156個(gè)等位位點(diǎn)，多態(tài)

4、位點(diǎn)99個(gè)。平均每組引物擴(kuò)增出31.2個(gè)等位位點(diǎn)，其中19.8個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，占等位位點(diǎn)總數(shù)的63.46％。采用TFPGA1.3軟件計(jì)算出兩群體多態(tài)位點(diǎn)數(shù)，平均多態(tài)位點(diǎn)百分率及雜和度，分別為96，85；61.94％，59.44％；0.2317，0.1987，兩群體遺傳近交系數(shù)為0.1265。說(shuō)明群體內(nèi)的總的遺傳分化中有12.65％是來(lái)自群體間的遺傳變異。PopGene1.31軟件計(jì)算出兩群體的Shannon's遺傳多樣性信息指數(shù)分別為：0

5、.2372，0.2052。群體間遺傳分化度Gst為0.1035。由以上結(jié)果可以看出，渤海地區(qū)三疣梭子蟹養(yǎng)殖群體與自然群體遺傳多樣性基本處于同一水平，兩群體間出現(xiàn)了一定的遺傳分化，但與群體內(nèi)的變異比較，群體間的變異相對(duì)較小。 2.利用10對(duì)選擇性引物組對(duì)我國(guó)三疣梭子蟹渤海、黃海和東海三個(gè)群體共60個(gè)個(gè)體進(jìn)行了遺傳多樣性分析。共擴(kuò)增出466個(gè)位點(diǎn)，多態(tài)位點(diǎn)360個(gè)。平均每對(duì)引物擴(kuò)增出46.6個(gè)等位位點(diǎn)，其中36個(gè)是多態(tài)性位點(diǎn)。利用T

6、FPGA1.3和PopGene1.31兩種軟件分析了群體內(nèi)的遺傳變異和群體間的遺傳結(jié)構(gòu)，計(jì)算不同地理種群的遺傳距離，用UPGMA法構(gòu)建了三個(gè)群體的系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)。渤海，黃海和東海群體的多態(tài)位點(diǎn)比例，Nei基因多樣性指數(shù)和Shannon’S遺傳多樣性信息指數(shù)分別為59.83％，71.99％，63.18％；0.2510，0.2598，0.2483：0.3678，0.3822，0.3688。三個(gè)群體的遺傳多樣性均處于同一水平。群體間遺傳分化系數(shù)G

7、st、Shannon's遺傳多樣性信息指數(shù)表明，群體的遺傳變異主要來(lái)源于群體內(nèi)個(gè)體間。UPGMA聚類圖顯示黃海與東海先匯為一支再與渤海相匯，遺傳距離顯示黃海與東海為一個(gè)群體。 3.為了確保試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，作者選取E-AGA／M-CTG，E-ACG／M-CAG及E-AAC／M-CCT 3組AFLP選擴(kuò)引物對(duì)07年采集的渤海野生三疣梭子蟹30個(gè)個(gè)體進(jìn)行了重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。引物組E-ACG／M-CAG對(duì)兩次提取的基因組DNA分別進(jìn)行了兩次