血塞通注射液對大鼠肝CYP2D1的抑制作用.pdf

1、中藥藥動學研究是中藥現(xiàn)代化的瓶頸之一,大多數(shù)中藥在體內(nèi)的代謝過程尚不清楚,致使其臨床應用缺乏科學依據(jù),從而影響療效或引起不良反應。隨著中西醫(yī)結(jié)合日趨普遍,中西藥聯(lián)合使用發(fā)生藥物相互作用而引起的不良反應也屢見報道。
　　 血塞通注射液為三七提取物三七總皂苷制成的滅菌水溶液,臨床上主要用于心腦血管疾病的預防和治療,為缺血性腦病的首選藥物之一,并以其顯著的療效受到醫(yī)生和患者的歡迎。血塞通注射液臨床應用廣泛,不良反應卻時有發(fā)生。

2、　　 目前,對血塞通注射液體內(nèi)過程的研究還不充分,其是否會對肝藥酶產(chǎn)生影響迄今還未見報道。本室前期的研究表明,血塞通注射液在體外對大鼠CYP2D1有抑制作用。此次實驗,擬采用在體給藥的方式,研究血塞通注射液對探針藥物氫溴酸右美沙芬的體外轉(zhuǎn)化率和體內(nèi)藥動學的影響。進一步驗證血塞通注射液對大鼠CYP2D1的抑制作用。
　　 研究方法
　　 1血塞通注射液對氫溴酸右美沙芬體外轉(zhuǎn)化率的影響
　　 1.1給藥方案取雄性S

3、D大鼠30只,隨機分為6組,5個實驗組,均尾靜脈注射葡萄糖稀釋的血塞通注射液(7.2ml·kg-1),連續(xù)7d,分別于末次給藥后0h,2h,24h,48h,72h斷頭處死取肝臟；正常對照組,經(jīng)尾靜脈注射葡萄糖(7.2ml·kg-1),連續(xù)7d,于末次給藥后即刻處死取肝臟。
　　 1.2肝微粒體的制備鈣沉淀法制備大鼠肝微粒體
　　 1.3 Bradford法測定肝微粒體蛋白含量
　　 1.4孵育反應孵育體系總體積5

4、00μL,包含磷酸鹽緩沖液,MgCl2,EDTA,NADPH,肝微粒體和右美沙芬。
　　 1.5色譜條件色譜柱Diamonsil C18(200×4.6mm,5μm)；流動相為O.1％醋酸:乙腈=82:18；流速1ml·min-1；柱溫25℃；紫外檢測波長278nm,進樣量:20μl。
　　 1.6右美沙芬方法學考察對大鼠肝微粒體中右美沙芬的測定方法進行專屬性、回收率、精密度、穩(wěn)定性考察
　　 1.7酶活性測定以

5、右美沙芬的轉(zhuǎn)化率作為酶活性的指標
　　 1.8統(tǒng)計分析方法運用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析,所有的數(shù)據(jù)均以平均值±標準差((x)±s)表示,實驗用方差分析的方法分析各實驗組與對照組酶的活性差異。P<0.05認為有統(tǒng)計學意義。
　　 2血塞通注射液對右美沙芬藥動學的影響
　　 2.1給藥方案及血樣采集12只大鼠尾靜脈注射右美沙芬溶液(10 mg·kg-1),分別于給藥后10,30,60,120,180,24

6、0,360min由眼眶采血,分離血漿并于-20℃凍存?zhèn)溆谩?天后,每日尾靜脈注射葡萄糖稀釋的血塞通注射液(18ml·kg-1),連續(xù)給藥7d,末次給藥后,尾靜脈注射右美沙芬10 mg·kg-1,按上述方法采血、分離、凍存血漿。
　　 2.2血漿樣品處理取血漿100μl,加入50μl飽和碳酸鈉,渦旋30s,靜置,加入1ml0.1％三乙胺正己烷,渦旋振蕩3min,2500 r·min-1離心5min,吸取有機相,揮干,100μl流動

7、相復溶,取40μl進樣。
　　 2.3色譜條件色譜柱Diamonfil C18(200×4.6mm,5μm)；流動相為0.1％醋酸:乙腈=82:18；流速1ml·min-1；柱溫25℃；熒光激發(fā)波長280nm,發(fā)射波長320nm。進樣量:40μl。
　　 2.4方法學考察對大鼠血漿中右美沙芬的測定方法進行專屬性、回收率、精密度、穩(wěn)定性考察。
　　 2.5血藥濃度測定采用高效液相法(HPLC)測定血漿中右美沙芬的濃

8、度
　　 2.6統(tǒng)計分析方法采用配對t檢驗對右美沙芬單用和與血塞通注射液合用后的藥動學參數(shù)的差異進行比較,P<0.05認為有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果：
　　 1血塞通注射液對氫溴酸右美沙芬體外轉(zhuǎn)化率的影響
　　 1.1探針藥物方法學考察肝微粒體中的雜質(zhì)不干擾右美沙芬的測定,日間和日內(nèi)變異系數(shù)均小于15％,肝微粒體中右美沙芬的線性范圍是5.0～160.0μmol·L-1,標準曲線的相關(guān)系數(shù)為0.9998；方

9、法精密度、靈敏度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性均能達到生物樣品分析要求。
　　 1.2血塞通注射液對CYP2D1的抑制作用5個實驗組與對照組相比,僅末次給藥后0h取肝臟顯示出對CYP2D1的抑制作用(P<0.01),其余各時間點取肝臟均未顯示出明顯的抑制作用(P>0.05)。
　　 2血塞通注射液對大鼠體內(nèi)氫溴酸右美沙芬藥動學的影響
　　 2.1方法學考察血漿中的雜質(zhì)不干擾右美沙芬的測定,日間和日內(nèi)變異系數(shù)均小于15％,血漿中

10、右美沙芬的線性范圍是31.25～2000ng·ml-1,標準曲線的相關(guān)系數(shù)為0.9985；方法精密度、靈敏度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性均能達到生物樣品分析要求。
　　 2.2血塞通注射液對氫溴酸右美沙芬藥動學影響右美沙芬單用時的主要藥動學參數(shù)T1/2β,AUC0→t,CL分別是153.13±25.45min,85.574±9.89(μg·ml-1)·min,0.098·0.012ml·kg-1·min-1,與血塞通注射液合用后分別為179