乙肝表面抗原誘導的miRNAs抑制肝癌細胞中MICB的表達.pdf

1、肝癌(HCC)是世界上最常見的惡性腫瘤之一，致死率高，嚴重危害人類健康。目前認為病毒、宿主和環(huán)境因素之間復雜的相互作用最終導致了HCC的發(fā)生。HBV感染引起HCC的主要病因，但其具體的發(fā)病機制并不明確。研究表明乙肝表面抗原大蛋白在慢性乙型肝炎惡性轉化過程中起重要作用[1-6]。主要組織相容性復合物Ⅰ類相關分子MICB是NKG2D的配體，在腫瘤細胞免疫逃逸過程中起重要作用。我們篩選出受HBsAg調節(jié)的miRNAs，在過表達HBsAg的He

2、pG2細胞中有133個miRNAs是上調的，9個miRNAs是下調的。在這些受HBsAg調節(jié)的miRNAs中，有一部分miRNAs可以通過靶向MICB的3'-UTR從而抑制MICB的表達。
　　目的:構建穩(wěn)定表達HBsAg的細胞系，驗證受HBsAg調節(jié)的miRNAs，并深入研究其在肝癌細胞免疫逃逸中作用機制。
　　方法:
　　(1)HBsAg過表達載體轉染HepG2、Huh7細胞，構建穩(wěn)定細胞系，通過ELISA及wes

3、tern鑒定
　　(2)實時熒光定量PCR檢測穩(wěn)定表達HBsAg的肝癌細胞系miRNAs及MICBmRNA表達水平
　　(3)雙熒光素酶報告基因實驗驗證HBsAg及miRNAs對MICB3'-UTR的作用
　　(4)流式細胞術檢測細胞表面MICB的蛋白表達水平
　　(5)NK細胞殺傷實驗檢測細胞的逃逸免疫清除能力
　　結果:
　　(1)成功構建了穩(wěn)定表達HBsAg的肝癌細胞系
　　(2)測序分析

4、篩選出的miRNAs中，可能會調節(jié)MICB基因表達的miRNAs在HBsAg過表達HepG2和Huh7肝癌細胞系中上調
　　(3)HBsAg誘導的miRNAs下調肝癌細胞中MICB的表達
　　(4)與對照相比，miRNAs抑制劑部分恢復HBsAg過表達細胞系中MICB的表達
　　(5)在肝癌細胞HepG2.2.15中，HBV通過誘導miRNAs的表達下調細胞中MICB水平。
　　結論:
　　(1)HBsAg