蛇床子素對(duì)腰椎間盤突出致坐骨神經(jīng)痛的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、研究背景： 腰椎間盤突出癥是一種常見病、多發(fā)病，可引起下腰痛與坐骨神經(jīng)痛。長(zhǎng)期的慢性疼痛嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。但是腰椎間盤突出致坐骨神經(jīng)痛的發(fā)生機(jī)制至今尚不完全清楚。 傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，突出的腰椎間盤造成機(jī)械性壓迫是引起坐骨神經(jīng)痛的主要原因，但是最近的研究表明腰椎間盤突出癥患者的臨床癥狀與機(jī)械壓迫的程度相關(guān)性不大而與突出椎間盤組織引發(fā)的無(wú)菌性炎癥密切相關(guān)。各種文獻(xiàn)報(bào)道，前列腺素(prostaglandin，PG)、一氧化氮

2、(nitric oxide，NO)等炎性因子和白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-αTNF-α)等細(xì)胞因子在該過(guò)程中具有極為重要的作用。 目前，各種治療方法對(duì)椎間盤突出導(dǎo)致的坐骨神經(jīng)痛并不能達(dá)到很好的療效。 唐代孫思邈《備急千會(huì)要方》中的獨(dú)活寄生湯在治療椎間盤突出導(dǎo)致的坐骨神經(jīng)痛中表現(xiàn)出良好的療效。獨(dú)活為方中君藥，而蛇床子素是其主要有效成分

3、。蛇床子素在一些研究中顯示出突出的抗炎鎮(zhèn)痛作用。其抗炎作用與抑制PG、NO等炎性因子的水平有關(guān)。 椎間盤突出癥導(dǎo)致的坐骨神痛與PG、NO等炎性因子密切相關(guān)，而蛇床子素則可抑制PG、NO等炎性因子的水平。因此，蛇床子素有希望成為一個(gè)有前景的治療椎間盤突出致坐骨神經(jīng)痛的新藥。研究目的本研究將做以下三個(gè)方面的工作：首先，對(duì)現(xiàn)有椎間盤突出致坐骨神經(jīng)痛大鼠模型和硬膜外腔置管方法做出改進(jìn)；其次，評(píng)價(jià)蛇床子素對(duì)椎間盤突出致坐骨神經(jīng)痛大鼠模型的

4、作用；最后，探討蛇床子素對(duì)椎間盤突出致坐骨神經(jīng)痛大鼠模型產(chǎn)生作用的機(jī)制。 第一部分腰椎間盤突出致坐骨神經(jīng)痛和硬膜外腔置管大鼠模型的建立 方法：42只S-D雄性大鼠隨機(jī)分為3組：空白對(duì)照組(n=6)，假手術(shù)組(n=6)，髓核組(n=30)。 髓核組：行左側(cè)L5下關(guān)節(jié)突，L6上關(guān)節(jié)突和L5半椎板切除術(shù)，暴露左側(cè)L5背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion，DRG)以及部分脊髓硬膜囊。將從鼠尾部獲取的自體髓

5、核組織(約0.4 mg)覆蓋于L5 DRG及附近硬膜外腔，將PE-0503導(dǎo)管從L5半椎板切除的位置向頭側(cè)置入硬膜外腔，妥善固定。 假手術(shù)組：行左側(cè)L5 DRG及部分脊髓硬膜囊暴露并取尾部髓核組織，但不將其覆蓋于左側(cè)L5 DRG及附近硬膜外腔。以同樣的方法行硬膜外腔置管。 空白對(duì)照組：不做任何處理。 對(duì)大鼠進(jìn)行步態(tài)等一般行為學(xué)觀察。 每組取6只大鼠，術(shù)前1天及術(shù)后第1、3、7、14、21、28天對(duì)大鼠進(jìn)行

6、50％機(jī)械性撤足閾值(50％paw withdrawal threshold，50％PWT)的測(cè)定，評(píng)定其機(jī)械痛敏程度。 分別于術(shù)后第2、6、13、20天對(duì)髓核組大鼠行50μL 1％亞甲藍(lán)硬膜外腔注射后立即麻醉、解剖大鼠，確定導(dǎo)管尖端的位置及藥液擴(kuò)散程度。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取6只大鼠。 結(jié)果： 各組大鼠步態(tài)等一般行為在手術(shù)前后無(wú)明顯差異。 術(shù)前各組50％PWT在同一水平(P>0.05)。 髓核組術(shù)后各天5

7、0％PWT比術(shù)前明顯降低(P<0.05)，且與空白對(duì)照組或假手組比較有顯著性差異(P<0.05)。機(jī)械痛敏從術(shù)后第1天開始，術(shù)后第3天達(dá)到高峰，并至少維持至術(shù)后第28天。 空白對(duì)照組和假手術(shù)組50％PWT在手術(shù)前后無(wú)變化(P>0.05)，各時(shí)間點(diǎn)兩組間比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 解剖顯示所有PE-0503導(dǎo)管均位于硬膜外腔內(nèi)。以L5為中心向頭側(cè)和向尾側(cè)的擴(kuò)散節(jié)段分別為：術(shù)后第2天為2.53±0.33和0.38±0

8、.19；術(shù)后第6天為3.95±0.26和1.27±0.33；術(shù)后第13天為3.95±0.22和1.03±0.23；術(shù)后第20天為3.89±0.19和1.15±0.23。 結(jié)論： 本研究建立的椎間盤突出致坐骨神經(jīng)痛大鼠模型穩(wěn)定可靠，可以獲得28天以上的機(jī)械痛敏時(shí)間。本研究中硬膜外腔置管的方法對(duì)50％PWT無(wú)影響，導(dǎo)管位置和藥液擴(kuò)散平面確切。 第二部分蛇床子素對(duì)椎間盤突出致坐骨神經(jīng)痛大鼠模型的作用 方法：36

9、只S-D雄性大鼠隨機(jī)分為以下6組，每組6只大鼠： 髓核組：將尾部獲取的自體髓核置于L5 DRG及部分硬膜外腔，行硬膜外腔置管。 術(shù)后第2天給藥組：在髓核組的基礎(chǔ)上，術(shù)后第2天予50 μL 2％蛇床子素硬膜外腔注射。術(shù)后第6天給藥組，術(shù)后第13天給藥組，術(shù)后第20天給藥組分別將注藥時(shí)間改為術(shù)后第6、13，20天。 溶劑對(duì)照組：在髓核組的基礎(chǔ)上，于術(shù)后第2天予50 μL吐溫-80硬膜外腔注射。 各組分別于術(shù)前

10、1天及術(shù)后第1、3、7、14、21、28天，以及給藥或溶劑當(dāng)天和給藥或溶劑后1小時(shí)對(duì)各組大鼠進(jìn)行50％PWT的測(cè)定，評(píng)定其機(jī)械痛敏的程度。 結(jié)果： 各組術(shù)前50％PWT處于同一水平(P>0.05)，術(shù)后給藥前與術(shù)前相比明顯降低(P<0.05)。髓核組術(shù)后50％PWT比術(shù)前明顯降低(P<0.05)。 術(shù)后第2天給藥組和術(shù)后第6天給藥組給藥后各時(shí)間點(diǎn)50％PWT與給藥當(dāng)天給藥前相比明顯升高(P<0.05)，恢復(fù)至與術(shù)

11、前相同水平(P>0.05)，且與溶劑對(duì)照組或髓核組比較有顯著性差異(P<0.05)。 術(shù)后第13天給藥組和術(shù)后第20天給藥組給藥后1小時(shí)50％PWT與給藥當(dāng)天給藥前相比也明顯升高(P<0.05)，恢復(fù)至與術(shù)前相同水平(P>0.05)，且與溶劑對(duì)照組或髓核組相比有顯著性差異(P<0.05)。但于給藥后1天以后的各時(shí)間點(diǎn)，50％PWT又降至給藥當(dāng)天給藥前水平(P>0.05)，與溶劑對(duì)照組或髓核組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

12、 溶劑對(duì)照組給溶劑后各時(shí)間點(diǎn)與給溶劑當(dāng)天給溶劑前比較50％PWT無(wú)顯著性差異(P>0.05)，且各時(shí)間點(diǎn)與髓核組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： 2％蛇床子50 μL硬膜外腔注射在早期(術(shù)后第2天和術(shù)后第6天給藥)可完全抑制椎間盤突出致坐骨神經(jīng)痛大鼠模型的機(jī)械痛敏，在晚期(術(shù)后第13天和術(shù)后第20天)僅表現(xiàn)出一過(guò)性的鎮(zhèn)痛作用。 第三部分蛇床子素對(duì)椎間盤突出致坐骨神經(jīng)痛大鼠模型產(chǎn)生作用的機(jī)制探討

13、 方法：30只S-D雄性大鼠隨機(jī)分為以下5組，每組6只大鼠： 空白對(duì)照組不做任何處理。假手術(shù)組，髓核組手術(shù)操作和硬外置管方法見第一部分。 溶劑對(duì)照組和治療組分別在髓核組的基礎(chǔ)上，術(shù)后第6天給予50μL吐溫-80或2％蛇床子素硬膜外腔注射。 術(shù)后第7天取手術(shù)側(cè)L5 DRG，分別用SABC免疫組化法檢測(cè)環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)的表達(dá)和NADPH—d法檢測(cè)一氧化氮合酶(nitric

14、 oxide synthase，NOS)的表達(dá)。 結(jié)果： COX-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較與NOS陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的比較結(jié)果相同：假手術(shù)組與空白對(duì)照組比較或髓核組與溶劑對(duì)照組比較陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)無(wú)顯著性差異(P>0.05)。髓核組和溶劑對(duì)照組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比空白對(duì)照組和假手術(shù)組明顯升高(P<0.05)。治療組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比髓核組和溶劑對(duì)照組降低(P<0.05)，但仍高于假手術(shù)組和空白對(duì)照組(P<0.05)。 結(jié)論： 50 μL 2