清熱止血方、雷公藤多苷通過干預(yù)腎小球系膜細(xì)胞-足細(xì)胞軸中TNF-α、podocin治療紫癜性腎炎患兒蛋白尿的體外研究.pdf

1、　　目的：觀察過敏性紫癜腎炎(HSPN)患兒及健康患兒的血清熱聚合IgA1(aIgA1)對足細(xì)胞及系膜細(xì)胞的增殖影響,并制備 HSPN系膜細(xì)胞、足細(xì)胞損傷模型。用含藥血清作用于HSPN細(xì)胞損傷模型,顯微鏡下觀察系膜細(xì)胞增殖,足細(xì)胞形態(tài)變化,并從基因水平檢測用藥前后足細(xì)胞podocin mRNA表達(dá)的影響。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)通過親和層析法純化紫癜性腎炎(血尿蛋白尿型)患兒血清 aIgA1,作用于系膜細(xì)胞、足細(xì)胞制備 HSPN系膜

2、細(xì)胞、足細(xì)胞損傷模型。制備清熱止血顆粒、雷公藤多甙、清熱止血顆粒+雷公藤多甙、強(qiáng)的松+肝素四組含藥血清,干預(yù) HSPN 細(xì)胞損傷模型,觀察系膜細(xì)胞、足細(xì)胞形態(tài),通過 MTT 法檢測細(xì)胞增殖情況,ELISA法檢測 TNF-a分泌情況,RT-PCR檢測足細(xì)胞 podocin mRNA表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1.系膜細(xì)胞情況：
　　1.1 HSPN患者aIgA1在0.25mg/ml,0.5mg/ml,1mg/m

3、l,2mg/ml作用系膜細(xì)胞48小時各濃度組較對照有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在0.25mg/ml時開始促進(jìn)系膜細(xì)胞增殖,在 1mg/ml 促進(jìn)系膜細(xì)胞增殖作用最大(P=0.000)。健康組 aIgA1 在 0.5mg/ml, 48小時較對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,在0.5mg/ml時開始促進(jìn)系膜細(xì)胞增殖。
　　1.2 aIgA1刺激系膜細(xì)胞分泌TNF-α的情況,48小時HSPN患者及健康對照者aIgA1組較對照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000,

4、P=0.003)。
　　1.3含藥血清組清熱止血顆粒、雷公藤多甙、清熱止血顆粒+雷公藤多甙、強(qiáng)的松+肝素各組干預(yù)HSPN系膜細(xì)胞損傷模型48小時,檢測細(xì)胞增殖,清熱止血方+TW較對照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.014)。
　　1.4各用藥組干預(yù)HSPN系膜細(xì)胞損傷模型,檢測TNF-α分泌,48小時各組均較對照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中強(qiáng)的松+肝素、清熱止血方、清熱止血方+TW 組較對照組差異性最大(P=0.000,P=0.00

5、0,P=0.000)。
　　2.足細(xì)胞細(xì)胞情況：
　　2.1 HSPN患者aIgA1與系膜細(xì)胞共培養(yǎng)上清液、HSPN患者aIgA1、健康對照者刺激足細(xì)胞分泌 TNF-α的情況, 48 小時后各組較對照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(P=0.000,P=0.000,P=0.003)。
　　2.2各組含藥血清對足細(xì)胞損傷模型( HSPN患者aIgA1-系膜細(xì)胞共培養(yǎng)上清組)分泌細(xì)胞因子 TNF-α干預(yù) 48 小時各組較對照組

6、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。清熱止血方聯(lián)合雷公藤多苷,強(qiáng)的松加肝素較對照組差異更大。
　　2.3 各組含藥血清對足細(xì)胞損傷模型( HSPN 患者 aIgA1 組)分泌細(xì)胞因子TNF-α干預(yù) 48 小時各組較對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,清熱止血方+TW、TW 較對照組差異性更大(P=0.000)。
　　3.RT—PCR檢測足細(xì)胞podocin mRNA的表達(dá)
　　3.1 HSPN患者algAl及algAl

7、與系膜細(xì)胞共培養(yǎng)上清刺激足細(xì)胞24小時后,兩者均可下調(diào)podocin mRNA的表達(dá)(p=0.042,p=0.036)。兩兩比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。作用48小時后,兩者均下調(diào)podocin mRNA的表達(dá)。(p=0.032,p=0.009)。上清組與患者algAl比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.048)
　　3.2雷公藤多甙組、清熱止血方+TW組、強(qiáng)的松加肝素組作用于 HSPN足細(xì)胞損傷模型(aIgA1刺激組)24小時,較對照組統(tǒng)計(jì)學(xué)均有

8、意義,清熱止血方組雖較對照組比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；48小時,各組較對照組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.3含藥血清干預(yù)足細(xì)胞損傷模型(aIgA1與系膜細(xì)胞共培養(yǎng)上清)24小時,各組較對照組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；48 小時,清熱止血方和清熱止血方加 TW 組 較空白對照組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.009,P=0.000)。
　　結(jié)論：
　　1.通過體外純化 mIgA1并熱聚合成 aIgA1,HSPN 患兒血清中 IgA1水平較健