糖尿病感覺神經(jīng)病變大鼠急性心肌缺血-再灌注損傷的病理學特征.pdf

1、目的：
　　1、采取高脂高糖飼料結(jié)合腹膜下注射小劑量STZ的方法創(chuàng)建Ⅱ糖尿病感覺神經(jīng)病變大鼠模型，這個過程更好的模擬人類Ⅱ糖尿病的自然病程（從胰島素抵抗到β細胞損傷）以及代謝異常的特征。
　　2、研究糖尿病感覺神經(jīng)病變大鼠在急性心肌缺血/再灌注期間的心臟功能改變、室性心律失常發(fā)生率以及心肌組織急性缺血/再灌注損傷的程度。進一步闡明糖尿病心臟在急性缺血/再灌注時發(fā)生的以上改變與糖尿病感覺神經(jīng)病變的聯(lián)系以及相關(guān)機制。
　　

2、方法：
　　研究從以下方面進行：
　　1、Ⅱ型糖尿病感覺神經(jīng)病變大鼠模型的創(chuàng)建。健康雄性SD大鼠，2月齡，體重200-220g，高脂高糖飼料持續(xù)喂養(yǎng)14周。在第4周末，確保大鼠禁食12h后，無菌操作條件下腹膜下注射STZ（30mg/kg）來誘導糖尿病。于給藥24h后每天測空腹血糖，連續(xù)測七天，以7次空腹血糖值均>16.7mmol/L為糖尿病大鼠成模標準。于第4周末（注射STZ前）和第14周末（注射STZ10周后）采血測量胰島

3、素濃度和血清甘油三酯水平(ELISA)，并對比兩組胰島素敏感指數(shù)。所有大鼠每周測一次體重和甩尾反射潛伏期，并對比二者隨時間的變化情況。
　　2、急性心肌缺血/再灌注損傷。采用Evans藍+TTC雙染色的方法測定心肌缺血區(qū)及梗死區(qū)面積；采用TUNEL染色法來測定缺血區(qū)心肌細胞凋亡；使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)對缺血區(qū)心肌組織caspase-3蛋白的表達進行定量分析；采用Western Blot方法檢測Bcl-2和Bax的表達。

4、
　　3、I/R期間室性心律失常的比較。室性心律失常的嚴重程度由缺血/再灌注期間VT和VF的發(fā)生率、發(fā)生次數(shù)和持續(xù)時間來分析。
　　4、急性心肌缺血/再灌注期間心臟功能的改變。收集I/R期間所有的左心室收縮壓（LVSP）、左心室舒張末期壓（LVEDP）、心率（HR）、左心室內(nèi)壓最大上升速率（+dP/dtmax）以及左心室內(nèi)壓最大下降速率（-dP/dtmax）進行分析。
　　結(jié)果：
　　1、經(jīng)過4周高脂高糖飲食喂養(yǎng)

5、，與對照組相比，模型組大鼠體重發(fā)生明顯升高（P<0.05），血糖值和甘油三酯無明顯差別。然而，注射STZ10周后，模型組大鼠體重顯著低于對照組（P<0.01），血糖水平及血清甘油三酯也顯著高于對照組（P<0.01）。從高脂高糖喂養(yǎng)4周開始到14周，模型組的胰島素敏感指數(shù)一直顯著低于對照組（P<0.05），提示模型組極有可能存在胰島素抵抗。從腹腔注射STZ5周后，與對照組相比，模型組反映感覺神經(jīng)功能的甩尾潛伏期的顯著延長（P<0.05）。

6、
　　2、糖尿大鼠I/R組心肌梗死面積、心肌細胞凋亡指數(shù)顯著大于同周齡的正常大鼠I/R組（P均<0.01）。糖尿大鼠I/R組缺血/再灌注區(qū)域心肌組織caspase-3蛋白也顯著大于正常大鼠I/R組（P<0.05）。與假手術(shù)組相比，經(jīng)歷缺血/再灌注過程的心肌組織Bax蛋白表達上升， Bcl-2蛋白表達下降。與正常I/R組相比，糖尿病I/R組心肌組織中 Bax蛋白表達明顯增加（P<0.05），Bcl-2蛋白表達明顯下降（P<0.05）

7、，導致Bcl-2/Bax下降更加明顯（P<0.01）。
　　3、在CAO之前室性心律失常非常罕見，而且各組間無顯著差異。然而， CAO后，與假手術(shù)組相比，VEB和VT&VF發(fā)生率顯著增加（P均<0.05）。糖尿病大鼠I/R過程中三次及三次以下室性心律失常的發(fā)生率及室速的發(fā)生次數(shù)和持續(xù)時間遠大于普通I/R組（P均<0.05）。糖尿病I/R組室顫死亡率顯著大于普通I/R組（P<0.01），提示糖尿病I/R組更溶易發(fā)生致死性室顫。

8、>　　4、與對應(yīng)的假手術(shù)組相比，經(jīng)過缺血/再灌注后，C-I/R組和DM-I/R組的LVSP、左室+dP/dtmax）以及左室-dP/dtmax均顯著下降（P均<0.05），而且與C-I/R組相比，DM-I/R組這三個指標下降更加顯著（P<0.05）；左心室舒張末期壓（LVEDP）顯著升高（P<0.05），而且與C-I/R組相比，DM-I/R組上升更加顯著（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1、高脂高糖喂養(yǎng)產(chǎn)生了胰島素抵抗，腹

9、腔注射低劑量STZ產(chǎn)生胰島素分泌的逐漸損害，這個過程更好的模擬人類Ⅱ糖尿病的自然病程（從胰島素抵抗到β細胞損傷）以及代謝異常（血脂異常）的特征，非常適合對人類Ⅱ型糖尿病的研究。同時，隨著糖尿病病程的延長，糖尿病大鼠發(fā)生顯著的感覺神經(jīng)病變。
　　2、糖尿病感覺神經(jīng)病變大鼠對缺血/再灌注損傷更敏感。
　　3、與正常大鼠相比，糖尿病大鼠缺血/再灌注期間室性心律失常發(fā)生率顯著增加，糖尿病導致的顯著感覺神經(jīng)病變可能與糖尿病大鼠心臟缺血