利用力學(xué)因素和干細胞的組織工程小口徑血管研究.pdf

1、隨著血管性疾病發(fā)病率的持續(xù)升高，對血管移植材料的需求也不斷膨脹，由于人工合成材料和自體血管移植存在諸多問題，研究者嘗試通過組織工程的方法來構(gòu)建血管。干細胞憑借強大的生長、增殖和分化潛能為其在組織工程中的應(yīng)用開辟了廣闊的前景；力學(xué)因素和生長因子在組織工程研究中的重要作用也得到了越來越多的認可。
　　 本文使用骨髓間充質(zhì)細胞和外周血內(nèi)皮祖細胞作為主要的研究對象，觀察其在力學(xué)因素和生長因子刺激下的增殖分化，并進行流動培養(yǎng)環(huán)境下的組織工

2、程血管體外構(gòu)建，探索血管組織工程的可行性途徑。其中主要用到的實驗方法包括使用Ficoll法分離兔骨髓間充質(zhì)干細胞、外周血內(nèi)皮祖細胞，酶消化法分離兔主動脈內(nèi)皮細胞，組織貼塊法分離大鼠主動脈平滑肌細胞，免疫鑒定后作為種子細胞。并使用磷酸鈣方法轉(zhuǎn)染293T包裝細胞，制備逆轉(zhuǎn)錄病毒，VEGF基因修飾兔骨髓干細胞。在培養(yǎng)細胞的同時我們通過MTT和SEM等方法檢測細胞黏附、增殖等生物細胞相容性指標(biāo)和拉伸實驗測定力學(xué)性能評價卵磷脂改性PCL電紡絲材料

3、。在確定了理想材料的同時，力學(xué)裝置的調(diào)試調(diào)試工作也基本完成。我們使用平行平板流動裝置對干細胞給予一定剪切力和生長因子刺激，通過免疫組化檢測干細胞向內(nèi)皮細胞誘導(dǎo)分化情況。并在模擬生物體正常血流情況的環(huán)境下，分別種植相應(yīng)的種子細胞初步構(gòu)建具有一定功能的人工血管，使用HE等方法進行形態(tài)功能檢測。
　　 在整個實驗過程中成功獲取了原代骨髓間充質(zhì)細胞、外周血內(nèi)皮祖細胞、成熟內(nèi)皮細胞及平滑肌細胞并建立方法，相應(yīng)抗體的免疫染色鑒定陽性率達60

4、％以上；構(gòu)建了實驗室首個適用于小口徑人工血管的細胞培養(yǎng)系統(tǒng)，可在一定程度上模擬人體血管內(nèi)壓力，脈搏和血液平流環(huán)境；通過測試我們認為卵磷脂改性的PCL高分子聚合物電紡絲支架的生物相容性良好，是一種可理想的組織工程血管支架材料；在力學(xué)因素和內(nèi)皮生長因子的作用下，外周血內(nèi)皮祖細胞有明顯的定向分化為成熟內(nèi)皮的能力，而骨銹間充質(zhì)細胞分化不明顯；使用生物反應(yīng)器系統(tǒng)，初步構(gòu)建了以平滑肌細胞和骨髓間充質(zhì)細胞為種子細胞的小口徑人工血管，培養(yǎng)3天后細胞生長