新型肝炎相關(guān)病毒(HGV和TTV)的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該文研究分別對HGV和TTV進(jìn)行了一些基礎(chǔ)研究,該文分二部分:第一部分庚型肝炎病毒(HGV)的研究.該教研室曾經(jīng)構(gòu)建了HGV全基因組cDNA克隆pHGVqz,并在GenBank注冊(注冊號為AFO81782).為了進(jìn)一步闡明HGV的致病性和復(fù)制部位,該研究在獲得HGV全基因組cDNA克隆的基礎(chǔ)上,體外轉(zhuǎn)錄獲得了全長HGVRNA基因組,研究了該RNA轉(zhuǎn)錄體對恒河猴的致病性,并初步建立了HGV感染的細(xì)胞模型,主要工作如下:1、HGVRNA轉(zhuǎn)

2、錄體感染恒河猴的研究;以HGV全長cDNA基因組克隆為模板,體外轉(zhuǎn)錄制備了全長HGVRNA轉(zhuǎn)錄體,肝內(nèi)注射感染BK15和BY1兩只恒河猴,取其感染后陽性血清分別感染BS1和BM1恒河猴,然后取BM1陽性血清再感染BB1恒河猴.結(jié)論:恒河猴對HGV敏感,可作為實驗動物模型.HGV可在可猴中感染并輕度的肝炎樣病為.HGV可以在恒河猴肝組織復(fù)制,亦可在心臟和脾臟中復(fù)制.2、HGV細(xì)胞模型的初步建立;利用Lipofectamin將HGVRNA轉(zhuǎn)

3、錄體轉(zhuǎn)染,HepG2細(xì)胞,RT-PCR檢測培養(yǎng)細(xì)胞和上清中HGV正、負(fù)鏈RNA,在轉(zhuǎn)染后24H便可在培養(yǎng)上清中檢測到HGV負(fù)鏈RNA.結(jié)論:HepG2細(xì)胞不僅對HGV易感,而且可以支持HGV的復(fù)制增殖.3、HGVNS5基因在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)與鑒定.以pHGV-Iwh6T重組質(zhì)粒為模板,PCR擴增HGVNS5部分基因片段,BamHI和KpnI酶切后定向克隆至pPROEXHTa載體進(jìn)行序列測定.結(jié)論:在昆蟲細(xì)胞中成功地表達(dá)了具有免疫原性的H

4、GVNS5重組蛋白,可用于HGV感染的檢測,也為研究其結(jié)構(gòu)與功能提供物質(zhì)材料.第二部分輸血傳播性病毒(TTV)的研究.為探蛤TTV的分布和基因組結(jié)構(gòu),該研究檢測了TTV在上海地區(qū)獻(xiàn)血員、血透病人和肝病患者中的感染情況,并擴增克隆了TTV亞基因組.1、高危人群中TTV的感染率;設(shè)計TTV保守區(qū)域的特異性引物,PCR檢測ALT正常獻(xiàn)血員、血透病人和肝病患者中TTV的感染率.結(jié)論:上海地區(qū)ALT正常獻(xiàn)血員、血透病人和肝病患者中均存在TTV高感

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