仿刺參消化道中產(chǎn)酶菌株的篩選鑒定及其在仿刺參飼料中的應(yīng)用.pdf

1、從仿刺參(A.Japonicus)消化道中篩選出3株菌株，通過形態(tài)特征、生理生化特征和16SrDNA分子這三方面鑒定它們分別為:解淀粉芽孢桿菌X3-3(Bacillus amyloliquefaciensX3-3)、甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌X4-1（Bacillus methylotrophicusX4-1）和巨大芽孢桿菌X4-5(Bacillus megateriumX4-5)。其中解淀粉酶芽孢桿菌X3-3和甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌X4-1這兩株

2、細(xì)菌分泌消化酶活性較高，巨大芽孢桿菌X4-5則凈水效果較好。通過單因素控制實(shí)驗(yàn)得出解淀粉酶芽孢桿菌X3-3和甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌X4-1的最佳生長和產(chǎn)酶條件:解淀粉芽孢桿菌X3-3的最適生長溫度34℃-37℃，最適初始pH為8.0，最適鹽度為30。甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌X4-1的最適生長溫度為37℃，最適初始pH為7.0-8.0，最適鹽度為30。在水質(zhì)凈化分析方面，采用萘乙二胺分光光度法測定水質(zhì)中亞硝酸鹽含量，用靛酚藍(lán)分光光度法測定氨氮含量，

3、結(jié)果表明，巨大芽孢桿菌X4-5在改善養(yǎng)殖水質(zhì)方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
　　研判這三株菌作為益生菌的實(shí)驗(yàn)包括各種安全性檢測:對(duì)仿刺參消化道細(xì)胞的粘附作用、測定微生物對(duì)斑馬魚（Zebra fish，Danio rerio）毒性的飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、針對(duì)病原菌的拮抗實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，在以模式動(dòng)物斑馬魚為宿主的攻毒試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比較，實(shí)驗(yàn)組成活率沒有發(fā)生顯著變化，且成活率都高于90％;這三株菌在仿刺參消化道細(xì)胞中的粘附率都高于85％，說明這三種細(xì)

4、菌對(duì)仿刺參消化道細(xì)胞有較好的粘附能力，能夠在宿主腸道內(nèi)棲息定植;在菌株調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)方面，這3株菌均能夠與假單胞菌和副溶血弧茵等致病菌產(chǎn)生拮抗作用。
　　以1％劑量添加于飼料中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，解淀粉芽孢桿菌X3-3無論是單獨(dú)使用還是與巨大芽孢桿菌X4-5或/和甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌X4-1聯(lián)合使用皆能顯著(P＜0.05)提升仿刺參的生長和消化酶活，30d和60d的檢測結(jié)果差異不明顯（P＞0.05）;三種菌制劑的聯(lián)合使用在顯著提升仿刺參